Elektrofizjologiczne zapisy in vivo aktywności mózgu z wielu miejsc u szczurów

Zacznij od znieczulonego szczura zabezpieczonego w stereotaktycznej ramie z odsłoniętą czaszką.

Użyj punktów odniesienia na czaszce, aby skalibrować i zaznaczyć żądane współrzędne.

Wywierć otwory w zaznaczonych miejscach.

Usuń zanieczyszczenia i rozetnij zewnętrzną warstwę mózgu.

Często przepłukuj otwory solą fizjologiczną, aby zapobiec wysuszeniu.

Wywierć dodatkowe otwory i kotwiące, aby podeprzeć elektrody.

Zamontować elektrody referencyjne i elektrody rejestrujące elektrofizjologiczne. Zabezpiecz je, nakładając żywicę akrylową.

Ułóż elektrody z mikrodrutów wolframowych na ramie zgodnie z wielodocelowymi lokalizacjami w mózgu.

Wiele elektrod umożliwia jednoczesne rejestrowanie aktywności mózgu z wielu miejsc docelowych.

Korzystając z punktu odniesienia na czaszce, ustaw elektrody z mikrodrutów wolframowych.

Delikatnie włóż je do mózgu.

Skonfiguruj oprogramowanie rejestrujące, aby wykrywać aktywność mózgu.

Opuść elektrody na docelową głębokość i rozpocznij rejestrację danych.

Pod mikroskopem użyj standardowego stereotaktycznego narzędzia do wyrównywania szczurów, aby skalibrować wyznaczoną końcówkę do bregmy i wyreguluj siekacz, aż wyznaczone punkty dla bregmy i lambdy na narzędziu dotkną czaszki w tym samym czasie. Za pomocą uchwytu stereotaktycznego z kaniulą skalibruj go do bregmy, a następnie oblicz położenie wszystkich wywierconych otworów w czaszce.

Następnie zaznacz pozycje otworów, które mają zostać wywiercone, ostrożnie drapiąc czaszkę lub używając kolorowego markera chirurgicznego. Następnie za pomocą mikrowiertła ostrożnie wywierć wszystkie otwory o średnicy około 1 milimetra. W przypadku STN i SNr wywierć wspólny otwór o wymiarach około 2 milimetry na 3 milimetry.

Weź jedną cienką kaniulę i zegnij końcówkę, aby utworzyć dwa haczyki. Następnie użyj haczyków, aby usunąć wszelkie zanieczyszczenia z wywierconych otworów i ostrożnie odetnij i usuń oponę twardą we wspólnym otworze STN/SNr. Następnie przepłucz wywiercone otwory solą fizjologiczną.

Nakładaj kroplę soli fizjologicznej co 15 minut na wywiercone otwory, aby zapobiec wysuszeniu mózgu i opony twardej. Następnie weź mikro-wiertło i pasującą mikrośrubę ze stali nierdzewnej. Wywierć otwór i wkręć mikrośrubę między wywiercone otwory referencyjnych elektrod zewnątrzoponowych nad móżdżkiem.

Następnie poprowadź końcówki elektrod drobną pęsetą i wsuń je bezpośrednio pod kość czaszki do wywierconych otworów. Zamocuj wszystkie elektrody zewnątrzoponowe za pomocą dwuskładnikowego akrylu dentystycznego. Upewnij się, że nie zakrywasz punktu bregma ani nie wpływasz na wspólny otwór STN/SNr.

Następnie włóż przygotowany uchwyt z elektrodami wolframowymi z mikrodrutu do ramy stereotaktycznej. Skalibruj najbardziej brzuszną elektrodę do bregmy, która jest przeznaczona do celowania w STN. Dostosuj do obliczonej pozycji nad wspólnym otworem STN/SNr i opuść elektrody w dół do mózgu.

Upewnij się, że elektrody wolframowe gładko wchodzą do mózgu. W tej procedurze skonfiguruj oprogramowanie do nagrywania, takie jak filtr pasmowoprzepustowy, i wzmocnij sygnał surowych danych. Następnie użyj internetowego LFP i filtra spajków z odpowiednimi ustawieniami.

W przypadku wszystkich filtrów należy użyć filtra typu Butterwortha. Skonfiguruj próg wartości szczytowej dla sortowania wartości szczytowych w trybie online. Większość programów do nagrywania pozwala na ustawienie progu skoku, który jest wartością amplitudy powyżej progu, w którym sygnał jest oznaczony przez oprogramowanie jako skok. Następnie powoli opuść elektrody wolframowe na 1 milimetr powyżej STN i poczekaj, aż sygnał się ustabilizuje, jeśli to konieczne.