JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 6:22 min. • July 8th, 2025
Weźmy odciętą głowę genetycznie zmodyfikowanej myszy. Nabłonek węchowy w nosie zawiera węchowe neurony czuciowe (OSN) z receptorami zapachowymi znakowanymi fluoroforem.
Usuń skórę i wypreparuj głowę, aby wyizolować przegrodę z przyczepionym nabłonkiem węchowym.
Oddziel i zabezpiecz nabłonek w komorze zapisowej.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego wykryj znakowane receptory, aby celować w dendrytyczne pokrętło OSN.
Weź ze sobą pipetę rejestrującą z roztworem wewnątrzkomórkowym zawierającym nystatynę, antybiotyk perforujący błonę.
Zastosuj nadciśnienie, aby uniknąć zatkania pipety. Włóż pipetę do nabłonka i zbliż się do OSN.
Przełącz się na podciśnienie, tworząc uszczelnienie z błoną komórkową. Zastosuj prąd, aby utrzymać membranę na poziomie potencjału spoczynkowego.
Nystatyna perforuje błonę, umożliwiając pomiar wewnątrzkomórkowych prądów jonowych.
Umieść pipetę zawierającą stymulator zapachu w pobliżu OSN. Uwolnij stymulant, który wiąże się z receptorami zapachu, wywołując otwarcie kanału jonowego, aby umożliwić napływ jonów. Zapisz wynikowe sygnały elektrofizjologiczne.
W przypadku tego protokołu miej myszy w wieku od 2 do 4 tygodni. W tej prezentacji wykorzystano myszy wykazu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych