JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:22 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz przymocowaną do stereotaktycznej ramy z odsłoniętą czaszką.
Czaszka posiada wszczepione gruntowe, referencyjne i kotwiące, a także kraniotomię w celu odsłonięcia mózgu.
Weź sondę silikonową przymocowaną do narzędzia do wkładania i zamontowaną na uchwycie.
Sonda posiada trzonki z liniowo ułożonymi elektrodami.
Włóż sondę do mózgu nieco powyżej żądanej głębokości i przymocuj ją do kotwiących za pomocą cementu dentystycznego.
Następnie opuść go jeszcze bardziej, aby osiągnąć docelową głębokość.
Zwolnij narzędzie do wkładania, a następnie zwolnij płytkę łączącą i przymocuj ją do czaszki.
Podłącz przewody uziemiające i odniesienia płytki złącza do odpowiednich przewodów na czaszce, aby uzyskać stabilne połączenie elektryczne.
Przykryj zespół osłoną ochronną.
Pozwól myszy na odzyskanie sprawności i rozpoczęcie nagrywania.
Elektrody rejestrują zewnątrzkomórkowo aktywność neuronalną w miejscu implantacji, zwaną potencjałem pola lokalnego.
Zamontuj narzędzie do wprowadzania elektrod na uchwycie stereotaktycznym i wyzeruj sondę na bregmie. Przesuń sondę do współrzędnych stereotaktycznych nad kraniotomią i powoli penetruj powierzchnię mózgu. Upewnij się, że trzonki sondy nie wyginają się i unikaj implantacji przez naczynia krwionośne. Następnie powoli opuść sondę do około 200 mikrometrów powyżej żądanej głębokości. Następnie przykryj kraniotomię i trzonki silikonowej sondy wysterylizowaną wazeliną w celu ochrony.
Następnie nałóż cement dentystyczny, aby przymocować podstawę sondy do kotwiącej w czaszce. Zaraz po nałożeniu cementu powoli przesuń sondę na docelową głębokość. Przesuń ostatnie 200 mikrometrów po nałożeniu cementu, aby zmniejszyć boczny ruch sondy i zapewnić minimalne uszkodzenie tkanki w obszarze docelowym.
Po utwardzeniu cementu zwolnij sondę z narzędzia do wkładania, topiąc wosk za pomocą kauteryzatora. Następnie zwolnij płytkę łączącą z urządzenia wprowadzającego i umieść ją w odpowiednim miejscu na czaszce za pomocą zacisku krokodylkowego. Przymocuj płytkę łączącą do czaszki za pomocą cementu dentystycznego.
W przypadku implantacji sondy w hipokampie, należy umieścić płytkę łączącą na przeciwległej kości ciemieniowej. Następnie przewody uziemiające i odniesienia płytki złącza do przewodów przymocowanych do dwóch nad móżdżkiem. Przytnij osłonę ochronną do odpowiedniej wysokości i umieść ją na silikonowej sondzie.
Następnie przymocuj pokrywę płytki łączącej i czaszkę za pomocą cementu dentystycznego, omijając skórę wokół odsłoniętej czaszki. Po zabiegu należy zastosować odpowiednie leczenie przeciwbólowe u myszy przez co najmniej dwa dni. Umieść mysz pojedynczo, aby zapobiec uszkodzeniu implantu.