JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:50 min. • July 8th, 2025
Zacznij od komory zapisowej zawierającej wypreparowany fragment mysiego jelita czczego, części jelita cienkiego, zanurzony w roztworze elektrolitu i zabezpieczony szpilką.
Segment jelita czczego obejmuje otaczającą tkankę tłuszczową z wstępnie wypreparowanym nerwem doprowadzającym krezki, który przekazuje sygnały z jelita czczego do mózgu.
Segment jest podłączony do otworów wlotowych i odpływowych komory w celu przepływu roztworu.
Weź elektrodę ssącą podłączoną do mikromanipulatora i jednostki nagrywającej.
Napełnij elektrodę ssącą roztworem elektrolitu i umieść ją w pobliżu nerwu doprowadzającego krezki.
Zastosuj delikatne ssanie, aby pociągnąć nerw z otaczającą tkanką tłuszczową, aby uzyskać szczelne uszczelnienie.
Zamknij port odpływowy, utrzymując dopływ, aby stopniowo zwiększać ciśnienie wewnętrzne i rozdęcie odcinka jelita czczego.
Powoduje to pobudzenie nerwu doprowadzającego krezki wokół jelita czczego, generując sygnał elektryczny.
Rejestruj aktywność nerwu doprowadzającego w odpowiedzi na zmiany ciśnienia w jelicie czczym.
W tej procedurze, za pomocą mikromanipulatora, opuść końcówkę elektrody ssącej do kąpieli narządowej. Następnie delikatnie odessać trochę roztworu Krebsa z kąpieli narządowej, tak aby końcówka elektrody była zanurzona w roztworze Krebsa. Upewnij się, że roztwór Krebsa zakrywa drut elektrodowy wewnątrz elektrody ssącej.
Następnie umieść końcówkę elektrody ssącej bezpośrednio obok przeciętego pasma nerwowego doprowadzającego i wciągnij przecięte pasmo nerwowe do naczynia włosowatego na całej jego długości. Manewruj końcówką elektrody w kierunku tkanki tłuszczowej i zasysaj ją do szklanej kapilary za pomocą tłoka, mechanicznie uszczelniając w ten sposób nerw w kapilarze od zawartości kąpieli narządowej.
Aby zweryfikować zapis aktywności nerwów doprowadzających, wykonaj wywołany rozdęciem rampy wzrost odpalania aferentnego, zamykając port wyjściowy, aby doprowadzić do stopniowego wzrostu ciśnienia w segmencie jelitowym. Żądany protokół eksperymentalny należy wykonać tylko wtedy, gdy trzy następujące po sobie rozciągnięcia rampy dają powtarzalne rozładowanie z wielu jednostek.