Monitorowanie kory mózgowej za pomocą układu wieloelektrodowego w odpowiedzi na czynniki wywołujące napady

Zacznij od wycinka mózgu zawierającego przednią korę zakrętu obręczy lub ACC i obszary wzgórza.

Za pomocą kotwicy przymocuj wycinek mózgu do matrycy wieloelektrodowej lub komory MEA, elektrycznego urządzenia do pomiaru sygnału wypełnionego natlenionym sztucznym płynem mózgowo-rdzeniowym.

Umieść elektrody przezczaszkowej stymulacji prądem stałym lub elektrody tDCS tak, aby jedna znajdowała się w pobliżu ACC, a druga umieszczona dystalnie do ACC, aby dostarczyć prąd stały do wycinka mózgu.

Rejestruj sygnały linii bazowej i dostarczaj prąd elektryczny do przedziału przez tDCS.

Dostosuj długość elektrody i prąd tDCS, aby uzyskać sygnały wysokiej jakości.

Za pomocą elektrody stymulującej dostarczaj impulsy prądu do wzgórza, które wywołuje sztuczne napady poprzez stymulację ACC.

Dostosuj prąd, aby stymulować szlak wzgórze-obręcz, który łączy wzgórze z ACC, aby uzyskać optymalną odpowiedź ACC.

Nagraj to za pośrednictwem MEA.

Wlać leki wywołujące drgawki do komory MEA

Za pomocą elektrod stymulujących dostarczaj impulsy elektryczne do szlaku wzgórze-obręcz i rejestruj odpowiedź ACC wywołaną lekiem.

Potwierdź umieszczenie sondy MEA w systemie wielokanałowym. Użyj jednej rurki, aby wprowadzić ACSF do komory MEA, a drugiej rurki, aby wyprowadzić ACSF z komory. Preparat należy w sposób ciągły przetapiać ciepłym natlenionym ACSF w temperaturze 30 stopni Celsjusza. Za pomocą mokrego bawełnianego wacika przenieś plasterek mózgu do MEA.

Ostrożnie przesuń wycinek mózgu, aby zorientować ACC nad elektrodami. Następnie ustabilizuj plasterek mózgu za pomocą kotwicy do plasterka, aby zapewnić dobre połączenie elektryczne między plasterkiem a elektrodami. Następnie umieść elektrodę anodową proksymalnie do ACC, a elektrodę katodową dystalnie do ACC. Zapisz natężenie pola według dwóch orientacji pola MEA. Następnie dostarcz prąd elektryczny za pomocą stymulatora.

Dostosuj odległość między dwiema elektrodami chlorku srebra do około 1,5 do 2 centymetrów i dostosuj natężenie prądu stymulatora, aby DCS wynosił od 0,5 do 2 miliamperów. W tej procedurze umieść elektrodę wolframową w MT i dostarczaj impulsy ze stymulatora do obszaru wzgórza plastru. Następnie użyj różnych natężeń prądu, aby określić próg, który wywołuje odpowiedź ACC.

Przesuń elektrodę wolframową wzdłuż szlaku wzgórze-obręcz, aby uzyskać optymalny profil odpowiedzi. Nagraj od 10 do 20 odpowiedzi ACC i użyj oprogramowania, aby automatycznie uśrednić wszystkie reakcje ACC wywołane pustą stymulacją.

Aby wywołać aktywność podobną do napadu, dodaj 250 mikromoli dla AP i 5 mikromolowych dwuklakuliny do roztworu perfuzyjnego i kontynuuj perfuzję plastra przez 2 do 3 godzin. Utrzymuj pompę na stosunkowo szybkim tempie perfuzji, co może pomóc w zapobieganiu gromadzeniu się gradientu pH. Następnie umieść elektrodę wolframową w MT i dostarcz stymulację elektryczną, aby uzyskać profil odpowiedzi ACC. Nagraj od 10 do 20 przebiegów i uśrednij odpowiedzi. Następnie zastąp roztwór perfuzyjny świeżym ACSF, aby wypłukać leki.