Wszczepienie zespołu elektrod do mózgu myszy w celu zapisu elektrofizjologicznego

Zamocuj znieczuloną mysz na stereotaktycznej ramce zawierającej poduszkę grzewczą, aby utrzymać temperaturę ciała.

Nałóż lubrykant, aby zapobiec wysuszeniu oczu i wstrzyknij podskórnie roztwór elektrolitu, aby utrzymać nawilżenie.

Usuń sierść ze skóry głowy, zdezynfekuj obszar i wstrzyknij podskórnie środek przeciwbólowy, aby zmniejszyć ból.

Wykonaj nacięcie, aby odsłonić czaszkę, a następnie wyczyść ją, aby uwidocznić anatomiczne punkty orientacyjne w celu identyfikacji obszarów mózgu.

Nałóż klej dentystyczny i utwardź go za pomocą lampy utwardzającej, aby wspomóc implantację elektrody.

Wywierć otwory nad hipokampem i móżdżkiem i zamontuj zespół elektrod za pomocą uchwytu na ramie stereotaktycznej.

Elektrody bipolarne rejestrują aktywność hipokampa, podczas gdy elektroda referencyjna uzyskuje podstawową aktywność z móżdżku.

Włóż elektrody, zabezpiecz zespół cementem dentystycznym i odłącz od uchwytu.

Ponownie podać roztwór elektrolitu i środek przeciwbólowy.

Poczekaj, aż mysz całkowicie się zregeneruje przed wykonaniem zapisu elektrofizjologicznego.

Przed przystąpieniem do operacji zapisz wagę 8-tygodniowych myszy VGAT-Cre. Następnie umieść zwierzę w komorze indukcyjnej w celu wywołania znieczulenia. Umieść znieczuloną mysz na poduszce grzewczej w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Jeśli używasz systemu temperatury sterowanego sprzężeniem zwrotnym, włóż sondę temperatury do odbytnicy zwierzęcia w celu monitorowania temperatury podczas operacji. Aby rozpocząć operację, przekieruj strumień znieczulenia wziewnego do stożka nosowego i zamontuj zwierzę w ramie stereotaktycznej, delikatnie umieszczając przednie górne zęby w siekaczu i przesuwając stożek na nos, a następnie umieść nauszniki w uszach i przymocuj do ramy stereotaktycznej.

Upewnij się, że głowa zwierzęcia jest wypoziomowana i wyśrodkowana i nie można jej przesunąć przy lekkim sondowaniu. Po zamontowaniu zwierzęcia wstrzyknij myszom 0,5 mililitra normozolu w celu nawodnienia i nałóż lubrykant do oczu, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Monitoruj głębokość znieczulenia, ściskając palec u nogi kończyny tylnej. Jeśli u zwierzęcia nie ma odruchu wycofania, przystąp do usuwania włosów na skórze głowy myszy wokół obszaru operacyjnego. Po zakończeniu trzykrotnie zdezynfekuj czysty obszar skóry naprzemiennym stosowaniem etanolu i jodu, kończąc jodem, a następnie wstrzyknij podskórnie 0,05 mililitra 0,25% bupiwakainy.

Wykonaj nacięcie na czaszce za pomocą skalpela, a następnie wytnij część skóry nożyczkami chirurgicznymi odsłaniającymi czaszkę. Odepchnij skórę na bok przed oczyszczeniem czaszki ze wszystkich tkanek leżących pod spodem za pomocą bawełnianego wacika. Oczyść czaszkę nadtlenkiem wodoru za pomocą sterylnych wacików bawełnianych i spraw, aby szwy czaszki, bregma i lambda były widoczne. Za pomocą wiertła zamontowanego stereotaktycznie przesuń końcówkę wiertła na bregma i zero współrzędnych x, y i z, a następnie podnieś i przesuń wiertło do lambda, aby określić jego współrzędne i określić, czy głowica jest wypoziomowana.

Po dokładnym wysuszeniu czaszki nałóż jedną kroplę samotrawiącego kleju dentystycznego za pomocą aplikatora. Odczekaj 60 sekund przed utwardzeniem kleju dentystycznego za pomocą dentystycznego światła UV przez 40 sekund. Błyszcząca powierzchnia wskazuje, że klej został skutecznie usieciowany z czaszką. Za pomocą wiertła o średnicy 0,031 cala ostrożnie wywierć dwa otwory obustronnie w czaszce z prędkością 5,000 obrotów na minutę lub obroty, unikając wiercenia w mózgu. Zastosuj kroplę soli fizjologicznej, aby ułatwić wiercenie otworów na żareny. W celu wszczepienia elektrod wgłębnych hipokampa należy wywiercić w odległości 3 milimetrów z tyłu i 3 milimetry z boku od bregmy.

Wywierć jeden otwór na elektrodę referencyjną nad móżdżkiem, za lambdą w odległości 6 milimetrów z tyłu i 0 milimetrów z boku od bregmy. Następnie zamontuj sześciopinowy cokół ze zmontowanymi elektrodami w uchwycie elektrody na ramie stereotaktycznej. Wyrównując elektrody nad odpowiednimi otworami zadziorów, powoli opuść i poruszaj zestawem słuchawkowym, aby zlokalizować dwie dwubiegunowe końcówki elektrod tuż nad lewym i prawym otworem zadziorów hipokampa, a jeśli to konieczne, wyreguluj elektrodę referencyjną tak, aby unosiła się nad otworem, nad móżdżkiem.

Gdy elektrody skrętne hipokampa znajdują się tuż nad otworami, wyzeruj oś z i powoli opuść elektrodę do minus trzech milimetrów do prawego i lewego hipokampa i wprowadź elektrodę odniesienia do otworu nad móżdżkiem. Przygotuj cement dentystyczny, mieszając proszek i płyn w misce do mieszania, a następnie przykryj powierzchnię czaszki, elektrody i przestrzeń między powierzchnią czaszki a dnem cokołu cementem dentystycznym.

Gdy cement wyschnie i stwardnieje, odłącz uchwyt elektrody od ramienia stereotaktycznego, podnieś ramię i zdejmij uchwyt z cokołu. Po podaniu myszy podskórnie ketoprofenu i normozolu, należy wyjąć zwierzę z ramy stereotaktycznej, aby przenieść zwierzę na podgrzewaną podkładkę w klatce wiwarium. Po pełnym wybudzeniu włóż pojedyncze zwierzę z powrotem do klatki wiwarium, karm je miękkim pokarmem i monitoruj utratę wagi codziennie do 72 godzin po operacji.