Testowanie funkcji nerwów czuciowych w chirurgicznie odnerwionym modelu myszy

Zacznij od znieczulonej myszy z odsłoniętą skórą grzbietową. Zdezynfekuj obszar i przykryj go.

Wykonaj nacięcie w linii środkowej od szyi do tuż nad ogonem.

Pociągnij skórę po lewej stronie, aby utworzyć płat skóry i odsłonić leżącą pod spodem tkankę.

Umieść mysz pod mikroskopem i zlokalizuj nerwy czuciowe.

Ostrożnie pociągnij i usuń te nerwy, nie naruszając naczyń krwionośnych.

Zwilż tkankę i usuń pozostałe nerwy z płata skóry, tworząc odnerwiony obszar.

Po prawej stronie pozostaw nerwy nienaruszone jako kontrolę. Zszyj nacięcie skóry.

Pozwól myszy na odzyskanie sprawności.

Aby ocenić stabilne odnerwienie kilka tygodni po zabiegu, użyj tej samej odnerwionej myszy z ogoloną skórą grzbietową.

Za pomocą igły nakłuć obszar kontrolny, generując mechaniczną stymulację.

To pobudza leżące poniżej nerwy, wysyłając sygnał do mózgu i powodując reakcję myszy.

Jednak nakłucie odnerwionego obszaru nie generuje odpowiedzi, co potwierdza rolę nerwów czuciowych.

Znieczulić zwierzę. Ogol całą skórę grzbietową i oczyść obszar podobnie jak w przypadku biopsji. Teraz wykonaj nacięcie za pomocą sterylnego skalpela wzdłuż grzbietowej linii środkowej od podstawy szyi do około pół centymetra nad ogonem. Używając sterylnych kleszczy, delikatnie odbij skórę po lewej stronie od boku, aby uwidocznić leżącą pod spodem tkankę od poduszek tłuszczowych łopatki w pobliżu szyi do tuż nad kończyną tylną.

Teraz zidentyfikuj grzbietowe nerwy skórne pod mikroskopem świetlnym. Wyglądają one jak białe pasma, które przemieszczają się doogonowo przez półprzezroczystą powięź ściany tułowia, zanim wykonają ostre zagięcia i wejdą w luźną tkankę łączną pod skórą. Następnie, za pomocą ultracienkich kleszczy, usuń nerwy wyłącznie z lewej strony zwierzęcia znajdujące się w miejscach anatomicznych od T3 do T12, wyrywając je z miejsca, w którym ich segmenty zginają się przy ścianie tułowia, do miejsc wejścia w skórę.

Ustaw kleszcze pionowo i chwyć nerwy około pół centymetra poniżej ich miejsc zgięcia. Po uchwyceniu pociągnij w górę, aby spowodować rozciągnięcie nerwu i oddziel się od otaczającej tkanki, aby je usunąć. Unikaj uszkodzenia sąsiednich naczyń krwionośnych. Upewnij się, że tkanka jest wilgotna przez cały zabieg, okresowo nakładając krople 0,9% sterylnego roztworu soli fizjologicznej.

Kontynuuj usuwanie wszystkich nerwów rozciągających się od ściany tułowia do skóry, ale nie zakłócaj nerwów w gęstej powięzi ściany tułowia. Następnie usuń wszelkie nerwy z odsłoniętego płata skóry. Włókna te obejmują dystalne gałęzie grzbietowych nerwów skórnych i pojawiają się jako białe rozgałęzione pasma zlokalizowane sporadycznie w tkance łącznej po stronie skórnej płata skóry.

Aby usunąć te drobne gałęzie, ustaw kleszcze mniej więcej równolegle do powierzchni skóry, chwyć nerwy i szarp w górę. W ten sposób usuń wszystkie widoczne nerwy. Nie nakłuwać naczyń krwionośnych i skóry.

Na tym etapie ważne jest, aby uniknąć pęknięcia sąsiednich naczyń krwionośnych. Jeśli znajdziesz nerw z sąsiednim naczyniem krwionośnym, podążaj za nim brzusznie do obszaru, w którym nie ma sąsiedniego naczynia, i usuń go, wyrywając.

Teraz tępo odbij skórę po prawej stronie nacięcia grzbietowej linii środkowej, ale nie usuwaj żadnych nerwów. Będzie to służyło jako kontralateralna kontrola sterowana pozorem. Na koniec zszyj zwierzę i monitoruj pooperacyjnie jak poprzednio. Później, aby potwierdzić stabilną utratę nerwów kilka tygodni po zabiegu, delikatnie nakłuj odnerwiony obszar za pomocą sterylnej igły podskórnej. Zwróć uwagę, czy zwierzę reaguje zazwyczaj drżeniem lub odwracaniem głowy. Jeśli obszar skóry został stabilnie odnerwiony, zwierzę będzie wykazywać niewielką reakcję lub nie będzie jej wcale.