JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:10 min • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy przystosowanej do ciemności.
Nałóż krople znieczulające i rozszerzające na rogówkę.
Umieść mysz na podniesionej platformie przed kopułą ze słabym czerwonym światłem.
Zamocuj elektrodę uziemiającą podskórnie na tylnej nodze, a elektrodę odniesienia w jamie ustnej.
Weź uchwyt elektrody z kapilarą wypełnioną roztworem soli. Przesuń palcem, aby usunąć pęcherzyki powietrza.
Całkowicie napełnij końcówkę kapilary roztworem soli.
Umieść kapilar na rogówce, aby zarejestrować elektroretinogram z bezpośrednim sprzężeniem lub DC-ERG.
DC-ERG mierzy subtelne reakcje elektryczne nabłonka barwnikowego siatkówki lub RPE.
RPE to wyspecjalizowana monowarstwa komórkowa, która utrzymuje zdrowie i integralność strukturalną komórek fotoreceptorowych.
Nałóż kroplę smaru do oczu, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu.
Sprawdź wartości rezystancji dla każdego oka, aby upewnić się, że są podobne i mieszczą się w zakresie.
Ustal stabilną linię bazową, a następnie rozpocznij rejestrację DC-ERG.
Aby ustawić mysz i elektrody do eksperymentu, znieczulij rogówkę myszy poddanej sedacji kroplą 0,5% kwasu solnego proparakainy przed rozszerzeniem rogówki kroplą 2,5% HCl fenylefryny i 0,5% tropikamidu.
Użyj kroku pierwszego z sześciu, aby włączyć przyciemnione czerwone światło wewnątrz kopuły i umieść mysz na podgrzewanym stole do nagrywania. Użyj kleszczy, aby ostrożnie namiotować skórę tylnej nogi, a jedną ręką mocno przytrzymaj elektrodę igłową, drugą ręką włóż elektrodę podskórnie do tylnej nogi, aby zamocować elektrodę na miejscu.
Umieść referencyjną elektrodę srebra/chlorku srebra w pysku zwierzęcia tak, aby wyśrodkowana osadówka spoczywała wzdłuż tylnego policzka i była utrzymywana na miejscu za zębami.
Przed umieszczeniem elektrod kapilarnych na oku ustaw uchwyt elektrody tak, aby szklane kapilary były ustawione pionowo i potrząśnij uchwytem elektrody palcem wskazującym, aby usunąć wszelkie pęcherzyki, które mogły zostać wprowadzone.
Użyj igły o rozmiarze 25G, aby wypełnić końcówki kapilarne HBSS i sprawdź naczynia włosowate, aby upewnić się, że w końcówkach nie ma uwięzionych pęcherzyków powietrza. Ustaw stojak uchwytu elektrody tak, aby otwarte końcówki naczyń włosowatych wypełnionych HBSS delikatnie stykały się z rogówką i uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków, odwróć dozownik żelu do oczu z lubrykantem, aby usunąć początkowe krople. Następnie umieść kroplę nawilżającego żelu pod oczy na każdym oku, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu podczas nagrywania.
Niniejszy artykuł opisuje metodę rejestracji bezpośrednio sprzężonych elektroretinogramów (DC-ERG) z nabłonka pigmentowego siatkówki (RPE) u znieczulonych myszy. Procedura obejmuje precyzyjne rozmieszczenie elektrod oraz utrzymanie przewodnictwa oka w celu zapewnienia dokładnych pomiarów odpowiedzi siatkówki.
Rejestracja bezpośrednio sprzężonego elektroretinogramu (DC-ERG) z nabłonka pigmentowego siatkówki (RPE) myszy zapewnia ilościowy i powtarzalny odczyt funkcji RPE, co wspiera wczesną walidację celów w procesie poszukiwania leków okulistycznych. Metoda ta umożliwia mechanistyczną redukcję ryzyka poprzez izolację odpowiedzi elektrycznych specyficznych dla RPE, co zwiększa pewność prognostyczną w odniesieniu do hipotez terapeutycznych ukierunkowanych na zdrowie siatkówki. Integracja DC-ERG z procesami odkrywania leków usprawnia podejmowanie decyzji w zakresie rozwoju portfolio dzięki możliwości przeprowadzania solidnych i porównywalnych testów funkcjonalnych.
Rejestracja DC-ERG znajduje się na styku wczesnego etapu odkryć i walidacji przedklinicznej, stanowiąc funkcjonalny test do weryfikacji hipotez i oceny związków wiodących w procesach badawczych nad okiem.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026