Zapis elektroretinogramu z bezpośrednim sprzężeniem nabłonka barwnikowego siatkówki u myszy

Zacznij od znieczulonej myszy przystosowanej do ciemności.

Nałóż krople znieczulające i rozszerzające na rogówkę.

Umieść mysz na podniesionej platformie przed kopułą ze słabym czerwonym światłem.

Zamocuj elektrodę uziemiającą podskórnie na tylnej nodze, a elektrodę odniesienia w jamie ustnej.

Weź uchwyt elektrody z kapilarą wypełnioną roztworem soli. Przesuń palcem, aby usunąć pęcherzyki powietrza.

Całkowicie napełnij końcówkę kapilary roztworem soli.

Umieść kapilar na rogówce, aby zarejestrować elektroretinogram z bezpośrednim sprzężeniem lub DC-ERG.

DC-ERG mierzy subtelne reakcje elektryczne nabłonka barwnikowego siatkówki lub RPE.

RPE to wyspecjalizowana monowarstwa komórkowa, która utrzymuje zdrowie i integralność strukturalną komórek fotoreceptorowych.

Nałóż kroplę smaru do oczu, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu.

Sprawdź wartości rezystancji dla każdego oka, aby upewnić się, że są podobne i mieszczą się w zakresie.

Ustal stabilną linię bazową, a następnie rozpocznij rejestrację DC-ERG.

Aby ustawić mysz i elektrody do eksperymentu, znieczulij rogówkę myszy poddanej sedacji kroplą 0,5% kwasu solnego proparakainy przed rozszerzeniem rogówki kroplą 2,5% HCl fenylefryny i 0,5% tropikamidu.

Użyj kroku pierwszego z sześciu, aby włączyć przyciemnione czerwone światło wewnątrz kopuły i umieść mysz na podgrzewanym stole do nagrywania. Użyj kleszczy, aby ostrożnie namiotować skórę tylnej nogi, a jedną ręką mocno przytrzymaj elektrodę igłową, drugą ręką włóż elektrodę podskórnie do tylnej nogi, aby zamocować elektrodę na miejscu.

Umieść referencyjną elektrodę srebra/chlorku srebra w pysku zwierzęcia tak, aby wyśrodkowana osadówka spoczywała wzdłuż tylnego policzka i była utrzymywana na miejscu za zębami.

Przed umieszczeniem elektrod kapilarnych na oku ustaw uchwyt elektrody tak, aby szklane kapilary były ustawione pionowo i potrząśnij uchwytem elektrody palcem wskazującym, aby usunąć wszelkie pęcherzyki, które mogły zostać wprowadzone.

Użyj igły o rozmiarze 25G, aby wypełnić końcówki kapilarne HBSS i sprawdź naczynia włosowate, aby upewnić się, że w końcówkach nie ma uwięzionych pęcherzyków powietrza. Ustaw stojak uchwytu elektrody tak, aby otwarte końcówki naczyń włosowatych wypełnionych HBSS delikatnie stykały się z rogówką i uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków, odwróć dozownik żelu do oczu z lubrykantem, aby usunąć początkowe krople. Następnie umieść kroplę nawilżającego żelu pod oczy na każdym oku, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu podczas nagrywania.