JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:10 min • July 8th, 2025
Zacznij od znieczulonej myszy przystosowanej do ciemności.
Nałóż krople znieczulające i rozszerzające na rogówkę.
Umieść mysz na podniesionej platformie przed kopułą ze słabym czerwonym światłem.
Zamocuj elektrodę uziemiającą podskórnie na tylnej nodze, a elektrodę odniesienia w jamie ustnej.
Weź uchwyt elektrody z kapilarą wypełnioną roztworem soli. Przesuń palcem, aby usunąć pęcherzyki powietrza.
Całkowicie napełnij końcówkę kapilary roztworem soli.
Umieść kapilar na rogówce, aby zarejestrować elektroretinogram z bezpośrednim sprzężeniem lub DC-ERG.
DC-ERG mierzy subtelne reakcje elektryczne nabłonka barwnikowego siatkówki lub RPE.
RPE to wyspecjalizowana monowarstwa komórkowa, która utrzymuje zdrowie i integralność strukturalną komórek fotoreceptorowych.
Nałóż kroplę smaru do oczu, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu.
Sprawdź wartości rezystancji dla każdego oka, aby upewnić się, że są podobne i mieszczą się w zakresie.
Ustal stabilną linię bazową, a następnie rozpocznij rejestrację DC-ERG.
Aby ustawić mysz i elektrody do eksperymentu, znieczulij rogówkę myszy poddanej sedacji kroplą 0,5% kwasu solnego proparakainy przed rozszerzeniem rogówki kroplą 2,5% HCl fenylefryny i 0,5% tropikamidu.
Użyj kroku pierwszego z sześciu, aby włączyć przyciemnione czerwone światło wewnątrz kopuły i umieść mysz na podgrzewanym stole do nagrywania. Użyj kleszczy, aby ostrożnie namiotować skórę tylnej nogi, a jedną ręką mocno przytrzymaj elektrodę igłową, drugą ręką włóż elektrodę podskórnie do tylnej nogi, aby zamocować elektrodę na miejscu.
Umieść referencyjną elektrodę srebra/chlorku srebra w pysku zwierzęcia tak, aby wyśrodkowana osadówka spoczywała wzdłuż tylnego policzka i była utrzymywana na miejscu za zębami.
Przed umieszczeniem elektrod kapilarnych na oku ustaw uchwyt elektrody tak, aby szklane kapilary były ustawione pionowo i potrząśnij uchwytem elektrody palcem wskazującym, aby usunąć wszelkie pęcherzyki, które mogły zostać wprowadzone.
Użyj igły o rozmiarze 25G, aby wypełnić końcówki kapilarne HBSS i sprawdź naczynia włosowate, aby upewnić się, że w końcówkach nie ma uwięzionych pęcherzyków powietrza. Ustaw stojak uchwytu elektrody tak, aby otwarte końcówki naczyń włosowatych wypełnionych HBSS delikatnie stykały się z rogówką i uważając, aby nie wprowadzić pęcherzyków, odwróć dozownik żelu do oczu z lubrykantem, aby usunąć początkowe krople. Następnie umieść kroplę nawilżającego żelu pod oczy na każdym oku, aby utrzymać przewodność i zapobiec wysuszeniu podczas nagrywania.