Name: Iniekcja doszklistkowa w celu ustalenia modelu chorób oczu (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T12:45:27.000+00:00
Duration: 5 min 37 s
Description: Poznaj technikę iniekcji doszklistkowej w badaniach chorób oczu. Naucz się unikać uszkodzenia soczewki i krwawienia podczas zabiegu w modelu zwierzęcym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Badania nad jaskrą w tym laboratorium są wspierane przez National Glaucoma Research z American Health Assistant Foundation.

<ol>
<li>Przygotować szklane pipety za pomocą wyciągacza do pipet, podłączyć je do strzykawki 1 ml i uszczelnić połączenie parafilmem. Nabrać 2 µl roztworu do końcówki pipety i przygotować do wstrzyknięcia.</li>
<li>Zanestezjować szczura poprzez podanie doszprysowe ketaminy (80 mg/kg) i ksylazyny (8 mg/kg) (stosunek objętości 2:1).</li>
<li>Przed wstrzyknięciem do ciała szklistego nanieść jedną kroplę 0,5% alkainy do oczu szczura jako znieczulenie miejscowe.</li>
<li>Ustawić szczura i odsłonić górny obszar nosowy oka.</li>
<li>Używając igły o rozmiarze 30 G, nakłuć górną część twardówki od strony nosowej na poziomie pars plana. Należy unikać dotykania mięśni ocznych&nbsp;i naczyń krwionośnych.</li>
<li>Wywrzeć lekki nacisk na gałkę oczną, aby usunąć niewielką ilość ciała szklistego z tylnej komory przez otwór nakłucia.</li>
<li>Wprowadzić końcówkę szklanej pipety przez otwór nakłucia pod kątem 45° przez twardówkę do ciała szklistego. Wstrzyknąć 2 µl roztworu do tylnej komory i pozostawić w tym miejscu przez kilka sekund, a następnie delikatnie wyciągnąć igłę. Należy unikać dotykania soczewki i naczyń wewnątrzgałkowych.</li>
<li>Po wstrzyknięciu do ciała szklistego nanieść na oko szczura maść okulistyczną Tobrex w celu zapobiegania infekcji.</li>
</ol>

<ol><li>Chiu, K., Lam, T. T., Ying Ku, W. W., Caprioli, J., Kwong Kwong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+and+N-methyl-d-aspartate+%28NMDA%29-induced+excitotoxicity+in+rat+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Calpain and N-methyl-d-aspartate (NMDA)-induced excitotoxicity in rat retinas.</a> Brain Research. 1046, 207-215 (2005).</li>
<li>Fisher, D., Pavlidis, M., Thanos, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cataractogenic+lens+injury+prevents+traumatic+ganglion+cell+death+and+promotes+axonal+regeneration+both+in+vivo+and+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Cataractogenic lens injury prevents traumatic ganglion cell death and promotes axonal regeneration both in vivo and in culture.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41, 3943-3954 (2000).</li>
<li>Ji, J. -Z., Elyaman, W., Yip, H. K., Lee, V. W. H., Yick, L. -W., Hugon, J., So, K. -F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CNTF+promotes+survival+of+retinal+ganglion+cells+after+induction+of+ocular+hypertension+in+rats%3A+the+possible+involvement+of+STAT3+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">CNTF promotes survival of retinal ganglion cells after induction of ocular hypertension in rats: the possible involvement of STAT3 pathway.</a> European Journal of Neuroscience. 19, 265-272 (2004).</li>
<li>Lam, T. T., Abler, A. S., Kwong, J. M. K., Tso, M. O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N-Methyl-D-Aspartate+%28NMDA%29-Induced+Apoptosis+in+Rat+Retina%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">N-Methyl-D-Aspartate (NMDA)-Induced Apoptosis in Rat Retina.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 40, 2391-2397 (1999).</li>
</ol>

Zwierzęta były traktowane zgodnie z protokołem wykorzystania zwierząt w badaniach zatwierdzonym przez Komitet ds. Wykorzystania Żywych Zwierząt w Nauczaniu i Badaniach (CULATR) Uniwersytetu w Hongkongu oraz zgodnie z oświadczeniami Association for Research in Vision and Ophthalmology dotyczącymi wykorzystania zwierząt w badaniach okulistycznych i badaniach nad wzrokiem.

Prawidłowe wstrzyknięcie domaciczyście jest przydatne zarówno przy tworzeniu modeli zwierzęcych, jak i w bezpośrednim leczeniu wewnątrzgałkowym. Po pierwsze, miejsce wstrzyknięcia nie powinno naruszać struktury siatkówki. Po drugie, należy unikać krwawienia, aby zmniejszyć ryzyko infekcji. Po trzecie, soczewka nie powinna zostać dotknięta, aby uniknąć traumatycznej zaćmy. Najważniejsze jest zminimalizowanie zakłócenia prawidłowej budowy oka.

<table><tbody><tr><td>Mikroskop operacyjny</td><td>Olympus Corporation</td><td>OME</td><td></td></tr><tr><td>Pipety szklane</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wytciągacz pipet</td><td>David Kopf Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strzykawki 1ml</td><td></td><td></td><td>jednorazowe</td></tr><tr><td>Igły 30G</td><td></td><td></td><td>jednorazowe</td></tr><tr><td>Ketamina</td><td>Aldasan</td><td></td><td>środek znieczulający</td></tr><tr><td>Ksylazyna</td><td>Aldasan</td><td></td><td>środek znieczulający</td></tr><tr><td>Alcaine</td><td>Alcon</td><td></td><td>0.5% chlorowodorek proparakainy</td></tr><tr><td>Tobrex</td><td>Alcon</td><td></td><td>maść, 3% tobramycyna</td></tr></tbody></table>

iniekcja doplastycznej w głąb ciała szklistego w celu ustanowienia modelu chorób oczu

Intravitreous Injection for Establishing Ocular Diseases Model

Iniekcja domacicza jest powszechnie stosowaną techniką w badaniach nad naukami o wzroku. Może być wykorzystywana do tworzenia modeli zwierzęcych chorób oczu lub jako bezpośrednia aplikacja miejscowej terapii. W niniejszym filmie przedstawiono sposób wykorzystania prostych i niedrogich narzędzi do przeprowadzenia procedury iniekcji domaczycznej. Zastosowano strzykawkę o pojemności 1 ml zamiast strzykawki Hamiltona. Przedstawiono praktyczne wskazówki dotyczące przygotowania odpowiednich igieł do iniekcji z pipet szklanych o idealnych końcówkach oraz sposobu szczelnego i łatwego połączenia igły strzykawki z pipetą szklaną.
Aby prawidłowo przeprowadzić zastrzyk domacicowy, należy przestrzegać trzech aspektów: 1) miejsce wstrzyknięcia nie powinno naruszać struktury siatkówki; 2) należy unikać krwawienia, aby zmniejszyć ryzyko infekcji; 3) soczewka nie powinna zostać dotknięta, aby uniknąć zaćmy pourazowej. Krótko mówiąc, najważniejszym punktem jest zminimalizowanie naruszenia prawidłowej struktury oka. Aby uniknąć uszkodzenia siatkówki, wybrano górny nosowy region oka szczura. Ponadto punkt nakłucia igłą znajdował się na poziomie płaszczyzny równoległej, około 1,5 mm od regionu limbalnego oka szczura. Przed wstrzyknięciem, poprzez otwór nakłucia, delikatnie usuwa się niewielką ilość ciała szklistego, aby obniżyć ciśnienie wewnątrzgałkowe. Kąt wstrzyknięcia wynoszący 45° zmniejsza prawdopodobieństwo wystąpienia zaćmy pourazowej w oku szczura, co pozwala uniknąć związanych z nią powikłań oraz wpływu czynników soczewkowych. Podczas tego zabiegu nie dochodzi do przecięcia spojówki ani mięśni oka, ani do krwawienia. Dzięki szybkości i minimalnemu zakresowi urazu, udany zastrzyk domacicowy można wykonać w ciągu kilku minut.
Zestaw do iniekcji opisany w tym konkretnym protokole jest przeznaczony do iniekcji do ciała szklistego. Przedstawione tutaj metody i materiały mogą być jednak wykorzystane również w innych procedurach podawania leków do mózgu, rdzenia kręgowego lub innych narządów u małych ssaków.

Iniekcja doszklistkowa jest powszechnie stosowaną techniką w badaniach nad naukami o widzeniu w kontekście chorób oczu lub jako metoda bezpośredniego zastosowania miejscowego leczenia. W tym filmie zaprezentowano protokół iniekcji doszklistkowej z użyciem strzykawki o pojemności 1ml z szklaną pipetą. Przedstawiono praktyczne wskazówki dotyczące unikania masywnych krwawień oraz uszkodzeń soczewki.

Iniekcja doplastycznej w głąb ciała szklistego w celu ustanowienia modelu chorób oczu

Iniekcja doplastyczna do ciała szklistego jest powszechnie stosowaną techniką w badaniach nad naukami o wzroku. Może być wykorzystywana do tworzenia modeli zwierzęcych z chorobami ocznymi lub jako...

Witajcie, jestem TU z laboratorium Guso. Dzisiaj przedstawię Państwu sposób wykonywania iniekcji doplasmowej (do ciała szklistego), co pozwala na tworzenie modeli zwierzęcych lub zapobieganie progresji chorób oczu. Oto schemat obrazowy.Aby pokazać miejsce wprowadzenia igły do czerwonego oka. Igłę wbija się do komory tylnej pod kątem 45 stopni względem powierzchni blizny. Stosując ten kąt 45 stopni, można uniknąć uszkodzenia soczewki.Podczas wstrzyknięcia domięśniowego do ciała szklistego wykonujemy iniekcję wewnątrzgałkową z wykorzystaniem mikroskopu operacyjnego. Znieczulenie zostanie przeprowadzone za pomocą koktajlu ketaminy i ksylazyny. Zastosowane zostanie również znieczulenie miejscowe oraz maść z antybiotykiem.Do iniekcji używamy pipet szklanych. Do ich przygotowania wykorzystujemy gotowy wyciągacz. Następnie należy usunąć bardzo ostry koniec pipety szklanej.Możemy podłączyć do tego strzykawkę o pojemności 1 ml. Punkt połączenia uszczelnimy lakierem. Następnie za pomocą tej szklanej rurki możemy powoli i starannie pobrać 2 µL roztworu do wstrzyknięcia, a następnie umieścić próbkę pod mikroskopem.Nanieś jedną kroplę znieczulenia miejscowego na powierzchnię, a następnie usuń nadmiar płynu. Użyj igły 30 G, aby przebić bliznę. Igła powinna być ustawiona prostopadle do powierzchni blizny, a do tkanki należy wprowadzić jedynie jej czubek.W miejscu nakłucia widać wydostający się płyn. Delikatnie dociśnij, aby usunąć więcej treści, co pozwoli uzyskać więcej miejsca. Do tylnej komory czerwonego oka wprowadź końcówkę szklanej pipety pod kątem 45 stopni do powierzchni blizny.Należy uważać, aby nie uszkodzić soczewki. Wstrzykiwać powoli. Nie wstrzykiwać żadnych pęcherzyków powietrza do Es. Po odczekaniu kilku sekund należy wyciągnąć igłę.Następnie należy nałożyć maść z antybiotykiem na oko. Głównym wyzwaniem podczas iniekcji do ciała szklistego jest zminimalizowanie manipulacji przy oku. Musimy uniknąć krwawienia wewnątrzgałkowego, uszkodzenia soczewki oraz odwarstwienia siatkówki.

intravitreous-injection-for-establishing-ocular-diseases-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Wstrzyknięcie do jamy oczu w celu utworzenia modelu chorób oczu

Ten film demonstruje metodę generowania mysiego modelu mysiego zapalenia błony naczyniowej oka (PMU) do badania poinfekcyjnego zapalenia błony naczyniowej oka. Po indukcji PMU przez wstrzyknięcie do ciała szklistego zabitych termicznie Mycobacterium tuberculosis u myszy uprzednio uodpornionej tym samym immunogenem, postęp przewlekłego stanu zapalnego w oku jest analizowany za pomocą obrazowania i badania...

Mysi model prątkowego zapalenia błony naczyniowej oka do badania poinfekcyjnego zapalenia błony naczyniowej oka

Ten film demonstruje technikę obrazowania in vivo do wykrywania i ilościowego określania stanu zapalnego oka w mysim modelu poinfekcyjnego zapalenia błony naczyniowej oka. Technika ta, znana jako optyczna tomografia koherentna (OCT), generuje obrazy przekroju poprzecznego oka o wysokiej rozdzielczości w celu oceny postępu choroby.

Obrazowanie optycznej koherentnej tomografii do oceny zapalenia błony naczyniowej oka w modelu mysim

Źródło: Park, S. W., et al. Podejście rąbkowe - podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do terapii genowej u myszy nabłonek barwnikowy siatkówki. J. Vis. Exp. (2015)Film opisuje metodę podsiatkówkowego wstrzykiwania wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) w modelu mysim. Szczegółowo opisano w nim procedurę, od znieczulenia i przygotowania oka po precyzyjne dostarczenie wektora lentiwirusowego, zapewniając integrację i ekspresję genów w RPE.

Podsiatkówkowe wstrzyknięcie wektorów wirusowych do nabłonka barwnikowego siatkówki w modelu mysim

Króliki są powszechnie wykorzystywane do badania farmakokinetyki leków podawanych wewnątrzgałkowo. Opisano metodę prowadzenia badań farmakokinetycznych leków wewnątrzgałkowych z wykorzystaniem oczu królika.

Zastosowanie oczu królika w badaniach farmakokinetycznych leków dogałkowych

Tutaj demonstrujemy nowatorskie podejście do wykorzystania wysokiej rozdzielczości optycznej koherentnej tomografii spektralnej (HR-SD-OCT) do wspomagania dostarczania środków terapii genowej do przestrzeni podsiatkówkowej, oceny jej zasięgu powierzchniowego i charakteryzowania żywotności fotoreceptorów.

Optyczna koherentna tomografia myszy o ultrawysokiej rozdzielczości wspomagająca wstrzyknięcie do gałki ocznej w badaniach nad terapią genową siatkówki

Opisujemy tutaj metodę iniekcji doszklistkowej i późniejszej oceny ilościowej bakterii w mysim modelu bakteryjnego zapalenia wnętrza gałki ocznej. Protokół ten można rozszerzyć o pomiar odpowiedzi immunologicznej gospodarza oraz ekspresji genów bakteryjnych i gospodarza.

Iniekcja doszklistkowa i ocena ilościowa parametrów infekcji w mysim modelu bakteryjnego zapalenia wnętrza gałki ocznej

Ten protokół opisuje kroki do wywołania Primed Mycobacterial Uveitis (PMU) u myszy. Ta metoda przedstawia kroki, które pomogą w wytworzeniu niezawodnego i solidnego zapalenia oka w systemie modelu mysiego. Korzystając z tego protokołu, wygenerowaliśmy oczy błony naczyniowej oka i nieobjęte stanem zapalnym inne oczy od pojedynczych zwierząt w celu dalszej oceny za pomocą testów immunologicznych, transkryptomicznych i proteomicznych.

Przygotowanie mykobakteryjnego zapalenia błony naczyniowej oka (PMU) jako model poinfekcyjnego zapalenia błony naczyniowej oka

Wykonano iniekcje doszklistkowe w oku owcy w celu dostarczenia wirusowej terapii genowej do siatkówki.

Iniekcje doszklistkowe do oka owcy

Ten protokół opisuje technikę wstrzykiwania dokomorowego u szczurów za pomocą centralnego nacięcia rogówki i długiego tunelu do przedniej komory. Ta metoda iniekcji minimalizuje ryzyko wywołania niezamierzonego uszkodzenia tkanki, a tym samym poprawia precyzję i odtwarzalność.

Wstrzyknięcie dokomorowe u szczurów o niskim ryzyku wystąpienia działań niepożądanych

Ten protokół opisuje unikalną technikę wykorzystującą podejście przezspojówkowe do dostępu do nerwu wzrokowego szczura w celu wykonania zastrzyków.

Podejście przezspojówkowe do wstrzyknięcia do nerwu wzrokowego szczura

To badanie przedstawia metodologię dostarczania leków do siatkówki i nerwów wzrokowych dorosłego szczura. Dodatkowo wprowadzono unikalną metodę pobierania tkanek w celu odgórnego pobrania en bloc nerwu wzrokowego i siatkówki u dorosłego szczura.

Terapeutyczne dostarczanie do oczu i zaawansowane pobieranie tkanek u dorosłych szczurów

Poznaj technikę iniekcji doszklistkowej w badaniach chorób oczu. Naucz się unikać uszkodzenia soczewki i krwawienia podczas zabiegu w modelu zwierzęcym.

Iniekcja doplastycznej w głąb ciała szklistego w celu ustanowienia modelu chorób oczu

Przeglądaj więcej filmów