JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:45 min. • July 8th, 2025
Weźmy pierwotne neurony korowe szczura w naczyniu ze szklanym dnem pokrytym polimerem.
Napraw neurony za pomocą paraformaldehydu, aby zachować struktury komórkowe.
Zmyć nadmiar paraformaldehydu.
Dodaj niejonowy detergent, aby przepuszczalność komórek.
Potraktuj komórki zielonym barwnikiem fluorescencyjnym ukierunkowanym na białko strukturalne nitkowate aktynę lub F-aktynę.
Usuń nadmiar plamy.
Zastosuj środek blokujący, aby zapobiec nieswoistemu wiązaniu przeciwciał.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami, które są skierowane przeciwko białkom dendrytycznym.
Usunąć niezwiązane przeciwciała.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z czerwonym fluoroforem, aby związać się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Zmyj nadmiar przeciwciał.
Zastosuj barwnik fluorescencyjny, aby zabarwić jądra. Usuń niezwiązany barwnik.
Dodaj odczynnik zapobiegający blaknięciu, aby zapobiec fotowybielaniu fluoroforowemu.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej uchwyć obrazy neuronów.
Zidentyfikuj region bogaty w F-aktynę w znakowanym dendrycie.
Za pomocą oprogramowania policz punkty lub plamki F-aktyny i ręcznie prześledź długość dendrytu, aby obliczyć gęstość F-aktyny.
Utrwal komórki 4% paraformaldehyd
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych