Izolacja włókien amyloidowych z ekstraktu z tkanki mózgowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:38 min. • July 8th, 2025
Weźmy ekstrakt z tkanki mózgowej myszy zawierający białka nieamyloidowe i fibryle amyloidowe, nierozpuszczalny agregat białkowy.
Dodaj stałą sacharozę i wymieszaj, zwiększając gęstość roztworu.
Przenieś go i odwiruj, aby oddzielić gęstsze białka od zanieczyszczeń.
Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad w buforze o wyższym stężeniu sacharozy, wymieszać i odwirować.
Zbierz górną warstwę zawierającą kilka włókienek amyloidu w świeżej probówce, dodaj bufor do płukania i wymieszaj.
Teraz odrzuć środkową warstwę i przenieś osad wzbogacony w fibryle amyloidowe do probówki zawierającej frakcję górnej warstwy, aby uzyskać maksymalną izolację.
Odwirować połączone frakcje i odrzucić supernatant. Dodaj bufor trawienny i inkubuj w celu degradacji wyłącznie białek nieamyloidowych.
Odwirować i usunąć supernatant. Umyj osad, aby usunąć resztki strawionych białek.
Zawiesić osad w buforze do solubilizacji na bazie sacharozy zawierającym detergent, który rozpuszcza pozostałe białka nieamyloidowe.
Odwirować, usunąć supernatant i ponownie zawiesić wyizolowane włókienka amyloidowe.
Zacznij od umieszczenia świeżo wypreparowanego lub zamrożonego obszaru tkanki mózgowej w dwumililitrowej probówce zaw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych