Ocena odpowiedzi interneuronów na chemoatrakcyjne sygnały z komórek śródbłonka okołokomorowego

Zamocuj trzykomorową wkładkę hodowlaną w naczyniu pokrytym polimerem w celu przyłączenia komórek.

Odwróć naczynie, zaznacz środkową komorę i zmień jej orientację. Dodaj pożywkę zawierającą interneurony do tego przedziału.

Dodaj pożywkę zawierającą ludzkie komórki śródbłonka okołokomorowego lub PVEC, komórki naczyń mózgowych, do jednego z zewnętrznych przedziałów.

W innym zewnętrznym przedziale dodać pożywkę zawierającą komórki śródbłonka nieokołokomorowe jako kontrolę.

Dodaj pożywkę do kokultury do naczynia, aby zapobiec wysychaniu polimerów. Inkubować w celu przylegania komórek.

Zdemontuj wkładkę, tworząc prostokątne plamy komórek z małymi bezkomórkowymi odstępami między każdym typem komórki.

Odświeżyć za pomocą pożywki do kohodowli i inkubować.

Komórki śródbłonka pobudzają interneurony do migracji do przestrzeni wolnych od komórek.

Tymczasem PVEC uwalniają chemiczne atraktanty, które zwiększają migrację interneuronów w kierunku łaty zawierającej PVEC.

Wyższa migracja interneuronów w kierunku łaty PVEC niż łatki komórki kontrolnej potwierdza odpowiedź interneuronów na chemoatrakcyjne sygnały z PVEC.

Aby przeprowadzić test chemoatrakcyjności, umieść trzydołkową wkładkę hodowlaną w