JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:08 min. • July 8th, 2025
Weźmy stałe skrawki organoidów móżdżku zawierające różne typy neuronów móżdżku.
Umyj sekcje w buforze, aby usunąć resztki mediów do zatapiania.
Inkubować w glicynie, aby zablokować resztkowe miejsca reaktywne przed utrwaleniem, zmniejszając niespecyficzne wiązanie podczas barwienia immunologicznego.
Dodaj niejonowy detergent, aby przepuszczalność komórek.
Umyć buforem, usuwając nadmiar detergentu.
Teraz wysusz szkiełko. Przenieś go do naczynia do barwienia immunologicznego z papierem nasączonym buforem, aby zapobiec wysuszeniu tkanek.
Zastosuj roztwór blokujący, który wiąże się z niespecyficznymi miejscami na neuronach.
Usuń roztwór blokujący. Inkubuj z przeciwciałami pierwszorzędowymi, które wiążą się z docelowymi antygenami w neuronach móżdżku.
Przemyć buforem, usuwając niezwiązane przeciwciała.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi związanymi z fluoroforem, aby związać przeciwciała pierwszorzędowe związane z antygenem.
Następnie przemyć buforem, usuwając niezwiązane przeciwciała.
Dodaj barwnik, aby zabarwić jądra komórkowe.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej uwidocznij markery wyrażane w neuronach móżdżku, wskazujące na dojrzewanie organoidów.
Umyj szkiełka mikroskopowe
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych