Opracowanie modelu in vitro zakażenia wirusem Zika w organoidach mózgowych

Weź płytkę wielodołkową zawierającą ludzkie organoidy mózgowe w pożywce do indukcji neuronalnej.

Organoidy zawierają komórki macierzyste, promieniste komórki glejowe, neuronalne komórki progenitorowe lub NPC oraz neurony ułożone w promienisty wzór zwany rozetą, naśladujący rozwijający się mózg.

Usunąć pożywkę i umyć organoidy buforem.

Wirusa Zika zawieszonego w buforze dodać do studzienek testowych i tylko bufor do studzienek kontrolnych.

Inkubuj, pozwalając wirusowi związać się ze swoimi receptorami na NPC i zostać zinternalizowanym.

Umyj w celu usunięcia niezinternalizowanych wirusów, a następnie dodaj świeżą pożywkę do indukcji neuronów i inkubuj.

Zinternalizowane wirusy wykorzystują maszynerię komórek gospodarza do tworzenia nowych cząsteczek wirusa.

Namnażanie się wirusa wywołuje komórkową reakcję stresową, która indukuje apoptozę, zmniejszając liczbę NPC dostępnych do rozwoju organoidów.

Z biegiem czasu zakażone organoidy wykazują zmniejszony rozmiar i zaburzoną morfologię, co odzwierciedla nieprawidłowy rozwój mózgu u ludzi zakażonych wirusem Zika.

Doprowadź 1X Zrównoważony Roztwór Soli Earle'a, 1X PBS i pożywkę do indukcji neuronalnej do 37 stopni Celsjusza w gorącej kąpiel