JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:20 min. • July 8th, 2025
Umieść dzikie i zmutowane mózgi Drosophila w roztworze zawierającym utrwalacz i detergent. Inkubuj z delikatnym kołysaniem.
Utrwalacz zachowuje morfologię tkanki, podczas gdy detergent przenika przez błony komórkowe.
Pozwól mózgom się uspokoić, a następnie usuń roztwór.
Umyj chusteczki buforem.
Dodaj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Usuń roztwór i dodaj pierwszorzędowe przeciwciała skierowane przeciwko specyficznemu białku, które reguluje rozwój aksonów w neuronach grzyba w mózgu lub MB.
Inkubować w celu promowania wiązania przeciwciał.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem skierowanymi na przeciwciała pierwszorzędowe.
Umyj ponownie, aby usunąć niezwiązane przeciwciała, a następnie ponownie zawieś mózgi w pożywce montażowej.
Zamontuj mózgi na szkiełku podstawowym i zwizualizuj je pod mikroskopem fluorescencyjnym.
W porównaniu z typem dzikim, zmutowane mózgi wykazują wadliwy fenotyp, z błędnymi projekcjami aksonów i brakującymi płatami MB.
Pod mikroskopem użyj pipety P200, aby przenieść od 10 do 15 wypreparowanych mózgów o tym samym genotypie do 0,5-mililit
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych