Określanie toksyczności neuronów wywołanej przez nanocząstki przy użyciu mikrogleju jako zastępczego bioczujnika

Pobrać kultury mikrogleju na wielodołkowej płytce zawierającej pożywkę.

Zastąp połowę pożywki w studzience testowej pożywką zawierającą nanocząstki srebra, a w studzience kontrolnej pożywką nośnikową. Inkubować.

Mikroglej internalizuje nanocząsteczki, ulega aktywacji i uwalnia cytokiny prozapalne.

Przenieść pożywkę nośnika i kondycjonowane pożywki zawierające te cytokiny do filtrów zamontowanych na probówkach zbiorczych.

Wirować w celu usunięcia nanocząstek, zatrzymując cytokiny.

Odwróć filtry do nowych probówek zbiorczych, odwiruj i zbierz pożywkę. Dodaj świeże nośniki.

Następnie weź hodowle neuronów podwzgórza.

Zastąp połowę pożywki studzienki kontrolnej pożywką pojazdu, a pożywkę studzienki testowej pożywką kondycjonowaną. Inkubować.

Cytokiny wiążą się z receptorami na neuronach podwzgórza, aktywując szlaki sygnałowe, które indukują śmierć neuronów.

Dodaj rezazurynę i inkubuj.

W żywych komórkach enzymy dehydrogenazy redukują słabo fluorescencyjną rezyzynę do fluorescencyjnej rezorufy.

Zmierz fluorescencję.

Zmniejszona fluorescencja wskazuje na zwiększoną śmierć neuronów w podwzgórzu, co sugeruje neurotoksyczność wywołaną przez nanocząstki.

Na początek zbierz 200 mikrolitrów poży