Generowanie eksperymentalnego autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego w modelu mysim

Wstrzyknąć peptydy pochodzące z mieliny z adiuwantem w pobliżu obwodowych węzłów chłonnych znieczulonej myszy.

Koniugaty peptyd-adiuwant aktywują komórki prezentujące antygen lub APC, które rozpoznają i przetwarzają peptydy.

APC następnie migrują do węzłów chłonnych i aktywują autoreaktywne limfocyty T.

Okresowo wstrzykiwać toksynę krztuśca dootrzewnowo, co przerywa ścisłe połączenia między komórkami śródbłonka i zwiększa przepuszczalność bariery krew-mózg

.

Autoreaktywne limfocyty T krążą we krwi i przekraczają barierę krew-mózg, aby dostać się do tkanki mózgowej.

Komórki te rozpoznają peptydy na osłonce mielinowej i uwalniają cytokiny.

Cytokiny te rekrutują makrofagi i limfocyty B do tego miejsca.

Makrofagi uwalniają reaktywne formy tlenu, które uszkadzają oligodendrocyty wytwarzające mielinę, podczas gdy limfocyty B oddziałują z limfocytami T, ulegają aktywacji i wytwarzają autoprzeciwciała skierowane do osłonki mielinowej.

Prowadzi to do demielinizacji, upośledzając przekaźnictwo nerwowe.

Podnieś ogon myszy; stopniowe opadanie wskazuje na uszkodzenie nerwów, sygnalizując początek autoimmunologicznego zapalenia mózgu i rdzenia kręgowego lub EAE.

Rozpocznij tę procedurę od znieczulenia myszy C57BL/6, które były trzymane w określonych warunkach wolnych od patogenów, jak opisano w protokole tekstowym. Zamocuj znieczuloną mysz w jednej ręce i wstrzyknij podskórnie 30 mikrolitrów peptydu MOG w kompletnej fluorescencyjnej emulsji adiuwantowej w każdy z boków tylnej nogi w bliskiej odległości od pachwinowych węzłów chłonnych.

Teraz połóż mysz na brzuchu i wstrzyknij 20 mikrolitrów emulsji peptydowej MOG do miękkiej tkanki tłuszczowej zarówno po lewej, jak i prawej stronie u nasady ogona. Wstrzyknąć również niewielką kroplę emulsji w szyjkę myszy. Wstrzyknąć myszu 100 mikrolitrów roztworu toksyny krztuścowej dootrzewnowo. Trzymaj głowę myszy poniżej środka ciała, aby uniknąć wstrzyknięcia do jelita.

Zastąp dietę podtrzymującą dietą hodowlaną, aby zapewnić myszom pokarm o wyższej zawartości energii przed przeżyciem spodziewanej choroby klinicznej. Iniekcję z toksyną krztuścową należy powtórzyć 48 godzin po pierwszym zabiegu.

Każdego ranka sprawdzaj stan zdrowia myszy EAE, zaglądając do wnętrza klatek. Oceniaj myszy EAE każdego popołudnia. Wyjmij z klatki każdą pojedynczą mysz biorącą udział w eksperymencie EAE i sprawdź, czy ogon ma tonus.

Przesuń ogon palcem w górę. Zdrowa mysz będzie trzymać ogon w górze. Jeśli rozpoczął się kliniczny EAE, tonus ogonowy będzie niżej widoczny przez stopniowe opadanie ogona. W końcu mysz nie będzie w stanie w ogóle podnieść ogona.