JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:26 min. • July 8th, 2025
Zacznij od roztworu zawierającego zielony barwnik fluorescencyjny związany z dużym łańcuchem dekstranu. Następnie dodaj roztwór czerwonego barwnika związanego z małym łańcuchem dekstranu.
Dokładnie wymieszaj barwniki i weź do strzykawki.
Wstrzyknij tę mieszaninę barwników dożylnie znieczulonej myszy przez zatokę zadoczodołową, żyłę za okiem.
Ta mysz cierpi na eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia kręgowego lub EAE.
W tym stanie bariera krew-mózg jest zaburzona przez osłabione ścisłe połączenia między komórkami śródbłonka naczyń krwionośnych mózgu ze szczelinami.
Pozwól myszy w pełni się obudzić i odzyskać ruchliwość, umożliwiając krążenie barwników.
Czerwony barwnik z małym łańcuchem dekstranu łatwo dyfunduje przez małe szczeliny do tkanki mózgowej, podczas gdy zielony barwnik związany z dużym łańcuchem dekstranu dyfunduje, jeśli uszkodzenie jest poważne.
Ilość każdego barwnika fluorescencyjnego w tkance mózgowej koreluje ze stopniem przerwania bariery krew-mózg
.W celu przygotowania roztworów podstawowych dekstranu należy rozpuścić 10 miligramów trzech kilodaltonów Dextran Texas Red w 500 mikrolitrach 0,9% roztworu chlorku sodu i 5 miligramów 10 kilodaltonu Dekstranu AlexaFluor 488 w 250 mikrolitrach 0,9% roztworu chlorku sodu.
W przypadku roztworu roboczego dekstranu, tuż przed wstrzyknięciem, należy odpipetować 55 mikrolitrów 10 kilodaltonów roztworu podstawowego Dextranu AlexaFluor 488 na kawałek folii uszczelniającej, a następnie dodać 55 mikrolitrów trzykilodaltonowego roztworu podstawowego Dekstranu Texas Red. Wymieszaj i zbierz 100 mikrolitrów do jednorazowej drobnej strzykawki.
Następnie umieść znieczuloną mysz w pozycji bocznej na stole. Wstrzyknij dożylnie 100 mikrolitrów fluorescencyjnych znaczników myszy, zanim mysz się obudzi. Pozwól znacznikowi krążyć przez 15 minut.