Określanie przerwania bariery krew-mózg za pomocą barwników fluorescencyjnych w mysim modelu EAE

Zacznij od roztworu zawierającego zielony barwnik fluorescencyjny związany z dużym łańcuchem dekstranu. Następnie dodaj roztwór czerwonego barwnika związanego z małym łańcuchem dekstranu.

Dokładnie wymieszaj barwniki i weź do strzykawki.

Wstrzyknij tę mieszaninę barwników dożylnie znieczulonej myszy przez zatokę zadoczodołową, żyłę za okiem.

Ta mysz cierpi na eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia kręgowego lub EAE.

W tym stanie bariera krew-mózg jest zaburzona przez osłabione ścisłe połączenia między komórkami śródbłonka naczyń krwionośnych mózgu ze szczelinami.

Pozwól myszy w pełni się obudzić i odzyskać ruchliwość, umożliwiając krążenie barwników.

Czerwony barwnik z małym łańcuchem dekstranu łatwo dyfunduje przez małe szczeliny do tkanki mózgowej, podczas gdy zielony barwnik związany z dużym łańcuchem dekstranu dyfunduje, jeśli uszkodzenie jest poważne.

Ilość każdego barwnika fluorescencyjnego w tkance mózgowej koreluje ze stopniem przerwania bariery krew-mózg

.

W celu przygotowania roztworów podstawowych dekstranu należy rozpuścić 10 miligramów trzech kilodaltonów Dextran Texas Red w 500 mikrolitrach 0,9% roztworu chlorku sodu i 5 miligramów 10 kilodaltonu