JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:46 min. • July 8th, 2025
Weźmy na przykład kriosekcje utrwalonych embrionalnych tkanek twarzoczaszki myszy zawierających komórki grzebienia nerwowego.
Umyj skrawki w buforze zawierającym niejonowy detergent w celu usunięcia podłoża osadzającego i przepuszczalności membran, umożliwiając dostęp do celów wewnątrzkomórkowych.
Dodaj roztwór blokujący, aby nasycić niespecyficzne miejsca wiązania.
Usuń nadmiar roztworu blokującego. Następnie inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko antygenom jądrowym, takim jak czynniki transkrypcyjne i markery proliferacji.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, aby związać się z przeciwciałami pierwszorzędowymi związanymi z antygenem.
Usunąć niezwiązane przeciwciała za pomocą buforu.
Dodaj podłoże zapobiegające blaknięciu z fluorescencyjnym barwnikiem jądrowym i przykryj szkiełkiem nakrywkowym.
Barwnik barwi jądra, a podłoże zapobiegające blaknięciu chroni sygnały fluorescencyjne podczas obrazowania.
Zobrazuj skrawki pod mikroskopem fluorescencyjnym, aby ocenić ekspresję i lokalizację markera jądrowego, wskazując na proliferację komórek grzebienia nerwowego i aktyw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych