Wytwarzanie dopaminergicznych organoidów neuronalnych z ludzkich embrionalnych komórek macierzystych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:55 min. • July 8th, 2025
Weźmy ludzkie embrionalne komórki macierzyste lub hESC w kolbie pokrytej macierzą zewnątrzkomórkową.
Zastąp pożywkę pożywką do indukcji neuronów i inkubuj, różnicując hESC w kolonie neuronalnych komórek progenitorowych lub NPC.
Dodaj roztwór enzymatyczny, aby oddzielić kolonie.
Odwirować, usunąć supernatant i ponownie zawiesić komórki w pożywce indukcyjnej z czynnikami wzrostu w celu wsparcia różnicowania NPC.
Dodaj zawiesinę komórkową do odwróconych mikrostudzienek w kształcie piramidy, aby utworzyć trójwymiarowe neurosfery.
Przenieś neurosfery na płytkę pokrytą macierzą zewnątrzkomórkową zawierającą pożywkę różnicującą z czynnikami wzrostu i małymi cząsteczkami. Inkubuj pod wpływem pobudzenia, aby promować różnicowanie się w dopaminergiczne neurony progenitorowe.
Zastąp pożywkę pożywką do dojrzewania neuronalnego i umieść neurosfery na krążku błony we wkładce do hodowli, umożliwiając dyfuzję powietrza i składników odżywczych.
Inkubuj w warunkach statycznych, aby utworzyć trójwymiarowe organoidy składające się z dojrzałych neuronów dopaminergicznych.
Te organoidy, naśladujące rozwijający się mózg, są przydatne do badania zwyrodnienia neuronów dopaminergicznych, charakterystycznego
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych