Ustalenie aktywnego zakażenia wirusem HIV w modelu szczurzym

Zacznij od znieczulonego szczura, zdezynfekuj jego ogoloną głowę i zabezpiecz ją w aparacie stereotaktycznym.

Wykonaj nacięcie w linii środkowej, aby odsłonić czaszkę.

Zaznacz dwie pozycje na czaszce i wywierć małe otwory.

Podłączyć strzykawkę z chimerycznymi wirusami zawierającymi ekotropowe RNA HIV w wektorze lentiwirusowym do aparatu stereotaktycznego.

Włóż igłę do otworu, celując w komórki kory mózgowej, w tym mikroglej, komórki odpornościowe mózgu.

Powoli wstrzykuj wirusy, aby zapewnić ich równomierne rozprowadzenie w korze mózgowej.

Po wstrzyknięciu zszyj nacięcie, zdezynfekuj obszar i pozwól szczurowi dojść do siebie.

Wstrzyknięty wirus oddziałuje z receptorami komórek mózgowych, łączy się i uwalnia RNA HIV do cytoplazmy.

RNA jest odwrotnie transkrybowane do DNA i integruje się z DNA komórki.

Zainfekowana komórka ulega ekspresji składników wirusa, wytwarzając nowe RNA i białka.

Gromadzą się one i uwalniają jako nowe wirusy, które zwiększają miano wirusa w mózgu, powodując aktywne zakażenie wirusem HIV.

W przypadku wstrzyknięcia EcoHIV EGFP, po potwierdzeniu braku reakcji na odruch pedałowania, należy ogolić włosy w okolicy mózgu i wysterylizować odsłoniętą skórę 2 razy 70% etanolem i peelingiem na bazie chlorheksydyny. Zabezpiecz szczura w pozycji leżącej w aparacie stereotaktycznym i wykonaj 5 do 6-centymetrowe nacięcie przez skórę wzdłuż linii środkowej skóry głowy.

Zaznacz jedną pozycję wiercenia w odległości 0,8 milimetra bocznego i jedną 1,2 milimetra rostralną do bregmy i wywierć otwór o średnicy 0,4 milimetra w każdej pozycji czaszki. Załadować 1,04 razy 10 do szóstej jednostki transdukcji na mililitr roztworu EcoHIV Lentivirus do 10-mikrolitrowej strzykawki iniekcyjnej i przymocować strzykawkę do aparatu stereotaktycznego.

Przesuń igłę blisko powierzchni jednego wierconego otworu i włóż igłę 2,5 milimetra do otworu. Wlej 1 mikrolitr roztworu wirusa w ilości 0,2 mikrolitra wirusa na minutę. Po wstrzyknięciu całego wirusa należy pozostawić igłę w obszarze wstrzyknięcia na pięć minut, a następnie powoli wycofać igłę, aż znajdzie się na zewnątrz czaszki szczura.

Zamknij nacięcie skóry szwem jedwabnym 4-0 i wysterylizuj roztwór 70% etanolem. Następnie umieść szczura w komorze rekonwalescencji z poduszką grzewczą z monitorowaniem do momentu leżenia.