JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:29 min. • July 8th, 2025
Zacznij od naczynia hodowlanego zawierającego zapłodnione zarodki danio pręgowanego w pożywce dla zarodków.
Umieść naczynie pod mikroskopem stereoskopowym i użyj kleszczy preparacyjnych, aby usunąć kosmówkę, zewnętrzną błonę otaczającą zarodki.
Dzięki temu zarodki mogą być wystawione na działanie otaczającego podłoża.
Przenieś te zdekorionowane zarodki do naczynia zawierającego pożywkę zarodkową z lekiem, który hamuje syntezę cholesterolu, co ma kluczowe znaczenie dla utrzymania integralności naczyń krwionośnych mózgu.
Inkubować w kontrolowanej temperaturze, aż zarodki rozwiną się w larwy.
Z biegiem czasu lek przenika do rozwijających się larw, hamując syntezę cholesterolu.
Niedobór cholesterolu osłabia naczynia krwionośne mózgu, powodując ich pękanie i wyciek krwi do mózgu, powodując powstawanie plam krwotocznych.
Obserwuj larwy pod mikroskopem stereoskopowym.
Oddziel larwy krwotoczne z wyraźnymi czerwonymi plamami od populacji niekrwotocznej.
Przenieś te krwotoczne larwy do nowego naczynia w celu dalszych badań.
Po 24 godzinach od zapłodnienia, pod mikroskopem stereoskopowym w jasnym polu, użyj ostrych, ultracienkich kleszczy preparacyjnych, aby usunąć zarodki z kosmówki w celu leczenia atorwastatyną. Następnie dodaj 30 mililitrów pożywki zarodkowej E3 do dwóch czystych szalek Petriego, jednej do leczenia, a drugiej do kontroli. Usuń 60 mikrolitrów wody z zarodka z naczynia zabiegowego i dodaj 60 mikrolitrów 0,5 milimolowej atorwastatyny, aby uzyskać 80% krwotoków larw.
Za pomocą pipety Pasteura przenieś 100 zarodków do każdej płytki w jak najmniejszej ilości wody. Inkubuj obie szalki w temperaturze 28 stopni Celsjusza. W dowolnym momencie po 50 godzinach od zapłodnienia, pod mikroskopem, użyj pipety Pasteura, aby ostrożnie oddzielić ryby z krwotokiem od populacji bez krwotoku i przenieść larwy do nowych naczyń zawierających świeże podłoże E3.
Aby ułatwić oddzielenie larw z dodatnim wynikiem krwotoku, można użyć ryb bez pigmentu lub ryb, które wyrażają białko fluorescencyjne w czerwonych krwinkach.