JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:27 min. • July 8th, 2025
Weźmy pierwotne nerwowe komórki macierzyste i progenitorowe oraz neurony, które mają sialoglykoproteiny oznaczone przez reporter kwasu sjalowego.
Dodaj paraformaldehyd, aby utrwalić komórki. Usunąć nadmiar paraformaldehydu za pomocą buforu.
Inkubować z mieszaniną reakcyjną zawierającą sondy chemiczne na bazie biotyny, środek redukujący i katalizator na bazie metalu.
Środek redukujący aktywuje katalizator, ułatwiając biotynylację sialoglykoprotein.
Usunąć mieszaninę reakcyjną i przemyć buforem. Dodać streptawidynę sprzężoną z fluoroforem, aby związać biotynylowane sialoglykoproteiny.
Usunąć niezwiązaną streptawidynę i przemyć buforem. Dodaj białka i niejonowy detergent, aby zablokować niespecyficzne miejsca i przepuszczalność komórek.
Usuń ten roztwór i inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi przeciwko określonym białkom komórkowym.
Usunąć niezwiązane przeciwciała.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem i barwnikiem fluorescencyjnym, aby związać przeciwciała pierwszorzędowe związane z białkiem i znakować jądra.
Usuń niezwiązane cząsteczki. Umyć buforem.
Za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej zobrazuj komórki, aby uwidocznić fluorescencyjne
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych