JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:53 min. • July 8th, 2025
Zacznij od szkiełka nakrywkowego zawierającego hodowane neurony wyrażające białka błony pęcherzyków synaptycznych, w tym znakowaną fluorescencyjnie synaptofizynę i synaptotagminę-1.
Usuń pożywkę, dodaj mieszaninę buforu depolaryzacyjnego i przeciwciał pierwszorzędowych, a następnie inkubuj.
Jony buforowe dostają się do komórek, stymulując fuzję pęcherzyków synaptycznych z błoną, która odsłania synaptotagminę-1.
Pierwszorzędowe przeciwciała selektywnie wiążą się z eksponowaną synaptotagminą-1.
Odrzucić bufor i przemyć pożywką w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Wprowadzić świeżą pożywkę i inkubować, aby ułatwić internalizację błony, tworząc pęcherzyki z recyklingu ze znakowaną synaptofizyną i synaptotagminą-1 związaną z przeciwciałami.
Usuń pożywkę, utrwal komórki i umyj.
Wprowadzić bufor blokujący na bazie detergentu z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem.
Detergent przenika do komórek, umożliwiając przeciwciałom drugorzędowym interakcję z synaptotagminą-1 związaną z przeciwciałami.
Podnieś szkiełko nakrywkowe, umyj je wodą i wysusz.
Umieść szkiełko nakrywkowe stroną zadrukowaną do dołu na szkiełku podstawowym do analizy optycznej podwójnie znakowanych pę
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych