JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:25 min. • July 8th, 2025
Zacznij od przylegającej hodowli neuronów traktowanej alfa-synukleiną lub agregatami alfa-S, które są grudkami nieprawidłowo sfałdowanego białka.
Te grudki agregują się, tworząc inkluzje wewnątrzkomórkowe.
Zastąp pożywkę roztworem utrwalającym, aby zachować integralność komórkową.
Usunąć roztwór utrwalający i przemyć buforem.
Następnie dodaj środek powierzchniowo czynny, aby przeniknąć przez błonę komórkową.
Usunąć środek powierzchniowo czynny i przemyć buforem.
Wprowadzić roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Teraz inkubuj z pierwszorzędowymi przeciwciałami, które wiążą się specyficznie z inkluzjami alfa-S i białkami strukturalnymi.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Inkubować z fluorescencyjnie znakowanymi przeciwciałami drugorzędowymi.
Usuń niezwiązane przeciwciała.
Dodaj barwnik fluorescencyjny, aby oznaczyć jądro.
Usuń plamę i umyj buforem.
Za pomocą podłoża montażowego zamontuj szkiełko nakrywkowe z neuronami na szkiełku.
Pod mikroskopem fluorescencyjnym obserwuj immunoznakowane inkluzje alfa-S w neuronie.
Aby przeprowadzić immunofluorescencję w chemicznym okapie, utrwal neurony za pomocą 2% paraformaldehydu w PBS i 5%
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych