JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:26 min. • July 8th, 2025
Zacznij od roztworu resiniferatoksyny (RTX), agonisty receptora TRPV1 o wysokim powinowactwie - wrażliwych na ból kanałów jonowych ulegających ekspresji w neuronach czuciowych.
Weź znieczuloną dorosłą mysz i podawaj RTX dootrzewnowo.
Lek dostaje się do krążenia ogólnoustrojowego i dociera do zwojów korzenia grzbietowego (DRG), skupiska ciał komórek neuronów czuciowych znajdujących się w pobliżu rdzenia kręgowego.
RTX przenika barierę krew-nerw i oddziałuje z neuronami czuciowymi o małej średnicy w DRG, które obficie wyrażają TRPV1.
Wiązanie RTX z TRPV1 aktywuje receptory, indukując ogromny napływ jonów wapnia do neuronów.
Wewnątrzkomórkowy wapń aktywuje enzymy, które degradują fosfolipidy błony komórkowej, białka komórkowe i DNA, ostatecznie prowadząc do śmierci neuronów.
Następnie śródnaskórkowe włókna nerwowe (IENF), obwodowe zakończenia neuronów czuciowych o małej średnicy, które unerwiają skórę, zaczynają ulegać degeneracji.
Ta degeneracja IENF powoduje utratę bodźców czuciowych ze skóry, tworząc w ten sposób model neuropatii małych włókien.
Na początek załóż środki ochrony osobistej i podejmij odpowiednie środki ostrożności podczas przygotowywania roztworu podstawowego resiniferatoksyny lub RTX. Rozcieńczyć jedną porcję 600 mikrolitrów w soli fizjologicznej do eksperymentu, a resztę podzielić na 12-mikrolitrowe porcje do przechowywania. W przypadku myszy testowych należy użyć ośmiotygodniowych dorosłych samców myszy ICR o wadze od 35 do 40 gramów. Pojedynczą dawkę roztworu RTX należy podać dootrzewnowo za pomocą strzykawki do mikroiniekcji. Następnie wstrzyknij drugiej grupie myszy równą objętość nośnika, aby służyła jako kontrola. Po wykonaniu wszystkich wstrzyknięć trzymaj myszy w ich domowych klatkach i upewnij się, że mają dostęp do jedzenia i wody.