JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:47 min • July 8th, 2025
Wypełnij szklaną kapilarnę iniekcyjną roztworem syntetycznych monomerycznych peptydów amyloidowych, które są nieprawidłowymi peptydami o właściwościach podatnych na agregację.
Wprowadzić kapilarnę do uchwytu do mikroiniekcji.
Jednocześnie umieść danio pręgowanego na szalce Petriego zawierającej roztwór znieczulający.
Gdy ryba zostanie znieczulona, przytrzymaj ją z boku kleszczami, aby zabezpieczyć głowę.
Wykonaj małe nacięcie w czaszce ryby na styku dwóch bocznych płytek, aby uzyskać dostęp do bogatego w neurony przodomózgowia.
Teraz włóż igłę kapilarną przez nacięcie i wstrzyknij roztwór peptydu amyloidowego do przodomózgowia.
Przenieś danio pręgowanego do pojemnika do odzyskiwania z krążącą wodą.
Wewnątrz przodomózgowia peptydy amyloidowe gromadzą się w pobliżu neuronów.
Peptydy te spontanicznie nieprawidłowo się fałdują, tworząc arkusze beta i agregują się wokół neuronów, tworząc toksyczne blaszki amyloidowe.
Blaszki te uszkadzają neurony i upośledzają ich transmisję sygnału.
W ten sposób ustanowiono model danio pręgowanego choroby Alzheimera, zaburzenia mózgu charakteryzującego się blaszkami amyloidowymi.
Za pomocą ściągacza igłowego o parametrach określonych w protokole tekstowym należy przygotować szklane kapilary iniekcyjne. Dostosuj ustawienie ciśnienia w źródle ciśnienia na 25 PSI. Następnie na mikrowtryskiwaczu ustaw ciśnienie trzymania na 20 PSI, ciśnienie wyrzutu na 10 PSI, wartość okresu na 2,5, a wartość bramkowania na 100 milisekund. Następnie napełnij szklaną kapilarnę roztworem do wstrzykiwań.
Następnie włóż szklaną kapilę do uchwytu mikroiniekcji i wyreguluj kąt wtrysku do 45 stopni. Umieść jedną rybę na nowej szalce Petriego wypełnionej roztworem znieczulającym. Po znieczuleniu należy przytrzymać rybę kleszczami i ustawić ją do wstrzyknięcia. Używając końcówki igły o rozmiarze 30, wygeneruj szczelinę w czaszce nad tektum optycznym, w którym spotykają się dwie boczne płytki. Używaj tylko końcówki igły i nie przebijaj czaszki na więcej niż 1 milimetr
.Następnie, kontynuując trzymanie ryby, włóż końcówkę szklanej kapilary przez miejsce nacięcia. Skieruj końcówkę szklanej kapilary w kierunku kresomózgowia pod kątem 45 stopni, a następnie wstrzyknij 1 mikrolitr roztworu. Umieść rybę z powrotem w pojemniku transportowym, aż wyzdrowieje. Następnie podłącz do pojemnika regularnie krążącą wodę dla ryb, aby zapewnić optymalną jakość wody.