JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:27 min • July 8th, 2025
Zacznij od podskórnego wstrzyknięcia emulsji zawierającej peptyd neuronalny i zabity termicznie adiuwant bakteryjny do znieczulonej myszy.
W tkance podskórnej adiuwant przyciąga komórki prezentujące antygen lub APC, które przetwarzają i prezentują peptydy neuronalne na głównych kompleksach zgodności tkankowej.
Aktywowane APC docierają do węzłów chłonnych i oddziałują z naiwnymi limfocytami T, indukując ich różnicowanie w autoreaktywne limfocyty T.
Te limfocyty T krążą i docierają do bariery krew-mózg lub BBB.
Następnie dootrzewnowo wstrzyknij egzotoksyny pochodzące z bakterii.
Egzotoksyny docierają do bariery krew-mózg, zwiększając jej przepuszczalność i umożliwiając infiltrację limfocytów T do ośrodkowego układu nerwowego (OUN).
W OUN limfocyty T oddziałują z rezydentnymi APC, prezentując peptyd neuronalny, promując uwalnianie cytokin, które indukują dalszą infiltrację komórek odpornościowych.
Komórki odpornościowe uwalniają cytokiny prozapalne, powodując uszkodzenie mieliny.
Ponadto limfocyty B oddziałują z limfocytami T i wydzielają autoprzeciwciała, które dodatkowo uszkadzają mielinę, ustanawiając eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE).
W tej procedurze rozpuść PTX w 2 mikrogramach na mililitr w 1x PBS i dobrze wymieszaj. Następnie wstrzyknij myszom 100 mikrolitrów PLP / CFA podskórnie, dwa razy u podstawy ogona podczas krótkiego znieczulenia izofluranem. Nie należy wstrzykiwać leku w tylną część szyi, ponieważ jakiekolwiek reakcje immunologiczne w skórze w górnej części pleców lub szyi mogą zakłócić obrazowanie głowy i rdzenia kręgowego.
Jedną do dwóch godzin po szczepieniu wstrzyknij myszom dootrzewnowo 100 mikrolitrów PTX.
Następnie, 24 godziny po szczepieniu, ponownie wstrzyknij myszom 100 mikrolitrów PTX. W przypadku myszy kontrolnych wstrzyknij 100 mikrolitrów CFA bez PLP dwukrotnie, u podstawy ogona.