JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 1:56 min • July 8th, 2025
Zacznij od strzykawki zawierającej komórki pomocnicze T lub Th17 zdolne do rozpoznawania białka akwaporyny-4 astrocytów w OUN, w tym w rdzeniu kręgowym, który odgrywa rolę w przekazywaniu sygnału do mózgu.
Wstrzyknij te komórki Th17 do żyły ogonowej skrępowanej myszy. Komórki dostają się do krwiobiegu i krążą po całym ciele.
Jednocześnie podawać dootrzewnowo toksynę bakteryjną pochodzącą z Bordetella pertussis.
Toksyna narusza barierę śródbłonkową naczyń krwionośnych i umożliwia komórkom Th17 przenikanie do rdzenia kręgowego.
Naciekane komórki Th17 oddziałują z astrocytami wyrażającymi akwaporynę-4 i ulegają aktywacji.
Te aktywowane komórki uwalniają cytokiny prozapalne, co powoduje infiltrację jednojądrzastych komórek odpornościowych, w tym makrofagów.
Makrofagi uwalniają cząsteczki zapalne, które uszkadzają osłonkę mielinową otaczających włókien nerwowych.
Ta demienizacja zakłóca przekazywanie sygnałów nerwowych, prowadząc do sztywności ogona i ograniczonego ruchu kończyn tylnych, co wskazuje na początek paraliżu.
W ciągu godziny od ich pobrania przenieś komórki do 1-mililitrowej strzykawki i dostarcz 200 mikrolitrów komórek każdemu zwierzęciu biorcy dożylnie przez żyłę ogonową. Następnie natychmiast wstrzyknij każdej myszy dootrzewnowo, a dwa dni później 200 nanogramów toksyny B. pertussis rozcieńczonej w 200 mikrolitrach PBS.