Barwienie immunofluorescencyjne populacji neuronów w embrionalnym mysim przewodzie pokarmowym

0 wyświetleń2:58 min • July 8th, 2025

Weź stały, transgeniczny embrionalny przewód pokarmowy myszy na pożądanym etapie rozwoju.

Jelitowy układ nerwowy przewodu pokarmowego obejmuje neurony jelitowe i neurony cholinergiczne wyrażające acetylotransferazę choliny.

Te neurony cholinergiczne wyrażają również białko fluorescencyjne napędzane przez promotor acetylotransferazy choliny.

Inkubuj przewód z niejonowym detergentem i białkami, aby przeniknąć komórki i zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.

Zastąp przeciwciałami pierwszorzędowymi. Inkubuj przeciwciała, aby związać swoje docelowe białka odpowiednio w neuronach.

Usunąć niezwiązane przeciwciała i przemyć buforem.

Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, aby specyficznie związać przeciwciała pierwszorzędowe związane z białkami docelowymi.

Usunąć nadmiar przeciwciał i przemyć buforem.

Zanurz oznakowany odcinek w pożywce montażowej zawierającej barwnik jądrowy w celu zabarwienia jąder. Teraz zamontuj szkiełko nakrywkowe.

Za pomocą mikroskopii konfokalnej wizualizuj i analizuj rozmieszczenie neuronów cholinergicznych w przewodzie pokarmowym.

Umieść drogi pokarmowe w 0,2-mililitrowej probówce zawierającej roztwór blokujący, składającej się z 1x PBS, 3% albuminy surowicy bydlęcej, 0,1 Triton X-100 i kołysz przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Po zablokowaniu odessać roztwór blokujący za pomocą pipety Pasteura z cienką końcówką i zastąpić optymalnym rozcieńczeniem przeciwciał pierwszorzędowych rozcieńczonych w roztworze blokującym.

Inkubuj przez cztery godziny w temperaturze pokojowej lub przez noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza na platformie bujanej. Po inkubacji przeciwciał pierwotnych odessać roztwór przeciwciała i przepłukać przewód pokarmowy w PBS trzy razy przez pięć minut każdy, a następnie przez godzinę w temperaturze pokojowej z kołysaniem.

Po ostatnim praniu zastąp PBS przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem rozcieńczonymi w roztworze blokującym i umieść probówki na platformie bujanej w ciemności na cztery godziny w temperaturze pokojowej lub na noc w temperaturze 4 stopni Celsjusza.

Po umyciu przewodów GI jak poprzednio, umieść kilka kropli fluorescencyjnego podłoża montażowego z DAPI na szkiełku podstawowym, a następnie zanurz przewód GI w podłożu montażowym i dodaj szkło nakrywkowe. Na koniec uchwyć obrazy każdego fluoroforu za pomocą mikroskopu konfokalnego, a następnie wykonaj komputerową analizę obrazu za pomocą odpowiedniego oprogramowania.

09:44

Identyfikacja warunków krytycznych dla barwienia immunologicznego w zarodkach mszyc grochowych: zwiększenie przepuszczalności tkanek i zmniejszenie barwienia tła

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

06:47

Ocena pierwotnej neurogenezy w zarodkach Xenopus za pomocą barwienia immunologicznego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:01

Barwienie immunologiczne całych siatkówek metodą CLARITY Tissue Clearing

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

04:52

Izolowanie komórek glejowych jelitowych z błony podśluzowej i blaszki właściwej myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:59

Barwienie immunofluorescencyjne do wizualizacji rozproszyłych nerwowych komórek macierzystych w wycinkach mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:04

Barwienie immunologiczne neuronów w wycinkach mózgu myszy po fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:26

Ilościowy test migracji komórek dla mysich jelitowych progenitorów nerwowych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

10:10

Wspomagane sonikacją barwienie immunofluorescencyjne tkanek drobnoustrojowych i larwalnych drobnoustrojowych i larwalnych Drosophila in situ

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:54

Barwienie immunologiczne w celu wizualizacji rozwoju mysiego jelitowego układu nerwowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:42

Ulepszona technika walcowania szwajcarskiego do przygotowania tkanki jelitowej do analiz immunohistochemicznych i immunofluorescencyjnych

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026