Barwienie immunofluorescencyjne populacji neuronów w embrionalnym mysim przewodzie pokarmowym
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:58 min. • July 8th, 2025
Weź stały, transgeniczny embrionalny przewód pokarmowy myszy na pożądanym etapie rozwoju.
Jelitowy układ nerwowy przewodu pokarmowego obejmuje neurony jelitowe i neurony cholinergiczne wyrażające acetylotransferazę choliny.
Te neurony cholinergiczne wyrażają również białko fluorescencyjne napędzane przez promotor acetylotransferazy choliny.
Inkubuj przewód z niejonowym detergentem i białkami, aby przeniknąć komórki i zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.
Zastąp przeciwciałami pierwszorzędowymi. Inkubuj przeciwciała, aby związać swoje docelowe białka odpowiednio w neuronach.
Usunąć niezwiązane przeciwciała i przemyć buforem.
Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi sprzężonymi z fluoroforem, aby specyficznie związać przeciwciała pierwszorzędowe związane z białkami docelowymi.
Usunąć nadmiar przeciwciał i przemyć buforem.
Zanurz oznakowany odcinek w pożywce montażowej zawierającej barwnik jądrowy w celu zabarwienia jąder. Teraz zamontuj szkiełko nakrywkowe.
Za pomocą mikroskopii konfokalnej wizualizuj i analizuj rozmieszczenie neuronów cholinergicznych w przewodzie pokarmowym.
Umieść drogi pokarmowe w 0,2-mililitrowej probówce zawierającej roztwór blokujący, składającej si
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych