Obrazowanie poklatkowe w celu monitorowania transkomórkowego rozprzestrzeniania się białek podobnych do prionów u nicień transgenicznych

Weźmy na przykład nicienie transgeniczne, które utrzymują się na tym samym etapie rozwoju.

Komórki mięśniowe ściany ciała tych nicieni wyrażają białka podobne do prionów, które są oznaczone czerwonym białkiem fluorescencyjnym i zlokalizowane w kwaśnych pęcherzykach.

Białka podobne do prionów są nieprawidłowo sfałdowane, agregując białka, które są związane z chorobami neurodegeneracyjnymi.

Następnie przenieś nicienie na podkładkę agarozową zawierającą nanocząstki polimerowe i roztwór znieczulający.

Połączone działanie nanocząsteczek i roztworu znieczulającego unieruchamia nicienie na poduszce agarozowej.

Umieść szkiełko nakrywkowe na waciku agarozowym i zamknij go.

Teraz umieść zespół padów agarozowych z nicieniami pod mikroskopem konfokalnym i ustaw odpowiednie parametry obrazowania.

Zdobądź obrazy poklatkowe białek znakowanych fluorescencyjnie w nicieniach, aby monitorować transport pęcherzykowy białek podobnych do prionów w komórkach mięśniowych ściany ciała i między nimi.

Po przygotowaniu zsynchronizowanych linii transgenicznych kontroli i domeny prionowej C. elegans oraz 10% wabiotek agarozowych zgodnie z dołączonym protokołem tekstowym, należy odpipetować 3 mikrolitry 100 nano