JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:36 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od zamrożonej pośmiertnej próbki ludzkiej tkanki mózgowej z potwierdzonego przypadku choroby neurodegeneracyjnej.
Wyciąć szarą masę bogatą w nierozpuszczalne agregaty białkowe, które są cechą charakterystyczną choroby.
Przenieść tkankę do homogenizatora.
Dodaj bufor zawierający inhibitory i homogenizuj w celu uwolnienia składników wewnątrzkomórkowych.
Inhibitory blokują enzymy proteazy i fosfatazy, zapobiegając degradacji białek.
Przenieś homogenat do probówki i dodaj jonowy bufor detergentowy. Inkubować.
Detergent rozpuszcza natywnie pofałdowane białka, podczas gdy nieprawidłowo sfałdowane agregaty białkowe pozostają nienaruszone.
Sonicate w celu całkowitej dysocjacji komórkowej.
Przenieść homogenat do probówki ultrawirówkowej i odwirować z dużą prędkością.
Agregaty osiadają na dnie.
Usunąć sklarowany nad osadem zawierający białka rozpuszczalne w detergentach.
Przemyć agregaty jonowym buforem detergentowym, odwirować i usunąć supernatant.
Dodaj bufor mocznikowy, aby zdenaturować agregaty białkowe, czyniąc je rozpuszczalnymi.
Przenieś rozpuszczone agregaty białkowe do probówki i krótko poddaj sonikacji, aby zapewnić całkowite rozpuszczenie.
Uzyskaj zamrożoną pośmiertną t
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych