JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:18 min. • July 8th, 2025
Weźmy perfundowany mózg myszy w buforze.
Mózg jest zakażony oporną na streptomycynę bakterią Listeria monocytogenes, bakterią chorobotwórcze.
Etap perfuzji usuwa krew z mózgu, zapewniając, że pomiary obciążenia bakteryjnego odzwierciedlają obciążenie Listeria monocytogenes w tkance.
Następnie homogenizuj mózg za pomocą wysterylizowanego homogenizatora, aby rozbić tkankę i uwolnić bakterie.
Teraz przygotuj seryjne rozcieńczenia homogenatu mózgu za pomocą buforu.
Umieść te rozcieńczenia na płytkach agarowych do infuzji serca mózgu zawierających streptomycynę, antybiotyk.
Inkubuj płytki. Agar do infuzji serca mózgu dostarcza składników odżywczych do wzrostu Listeria monocytogenes, podczas gdy streptomycyna wybiera oporne bakterie, umożliwiając tworzenie się tylko kolonii Listeria opornych na streptomycynę.
Policz liczbę kolonii na płytce, aby określić jednostki tworzące kolonie, miarę żywotnego obciążenia infekcyjnego bakterii w mózgu.
Za pomocą kleszczy otwórz czaszkę, aby odsłonić mózg i umieść szpatułkę między spodem mózgu a podstawą czaszki, aby ostrożnie przenieść mózg do 15-mililitrowej rurki zawierającej 5 mililitrów PBS o temperaturze 4 stopni Celsjusza.
W komorze bezpieczeństwa biologicznego włóż końcówkę i uruchom homogenizator tkankowy na 10 sekund w sekwencyjnych 5% roztworach wybielacza, sterylnej wody, 75% etanolu i sterylnej wody w oddzielnych 15-mililitrowych stożkowych probówkach. Gdy końcówka zostanie dokładnie wysterylizowana, homogenizuj zainfekowany mózg w jego probówce.
Przygotować dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia każdego homogenatu narządu w sterylnym PBS i umieścić rozcieńczenia na płytkach agarowych do infuzji serca mózgu. Następnie inkubuj kultury rozcieńczone homogenatem w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez noc i policz liczbę kolonii na każdej płytce, aby określić całkowitą liczbę bakterii na narząd lub mililitr krwi.