JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:31 min. • July 8th, 2025
W mózgu danio pręgowanego neurony wyrażają receptory oreksyny i kannabinoidowe, które regulują metabolizm.
U otyłości wywołanej dietą (DIO) danio pręgowanego receptory te coraz częściej kolokalizują się, tworząc heteromery, zmieniając sygnalizację w dół strumienia i wpływając na regulację metaboliczną.
Weź kriosekcje tkanki mózgowej zarówno od zebry z grupy kontrolnej, jak i DIO. Umyj sekcje buforem, aby usunąć medium do zatapiania.
Traktuj buforem blokującym przepuszczalność, aby przeniknąć przez błony komórkowe i zamaskować niespecyficzne miejsca wiązania. Umyć, aby usunąć nadmiar buforu.
Inkubować z pierwszorzędowym koktajlem przeciwciał skierowanym do receptorów. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Inkubować z różnymi przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi. Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj fluorescencyjny barwnik wiążący DNA, aby oznaczyć jądro. Następnie nałóż podłoże montażowe i uszczelnij sekcje szkiełkiem nakrywkowym.
Za pomocą mikroskopu konfokalnego wykryj fluorescencję przeciwciała. Zwiększona kolokalizacja przeciwciał u danio pręgowanego DIO w porównaniu z grupą kontrol
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych