Wykrywanie starzenia się neuronów w korowym przekroju organoidowym
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:04 min. • July 8th, 2025
Zacznij od szkiełka zawierającego cienką część organoidu korowego, który zawiera komórki glejowe i neurony na różnych etapach starzenia.
Starzejące się neurony, w stanie starzenia się ze spadkiem funkcji komórek, zawierają wysoki poziom beta-galaktozydazy.
Sekcja jest wstępnie traktowana utrwalaczem w celu ustabilizowania struktury komórkowej i środkiem przepuszczalnym w celu przepuszczalności ich błon.
Umieść szkiełko w pojemniku do barwienia, aby przemyć buforem w celu usunięcia wszelkich śladów roztworu.
Wybarwić szkiełko roztworem zawierającym substrat enzymu beta-galaktozydazy i rozpocząć inkubację.
Substrat dostaje się do komórek, gdzie beta-galaktozydaza rozszczepia substrat, wytwarzając produkt o niebieskim kolorze, który gromadzi się więcej w starzejących się neuronach.
Kilkakrotnie umyj sekcję.
Dodaj mocowanie zapobiegające blaknięciu i pozwól mu zastygnąć, zapewniając integralność poplamionej sekcji.
Obserwuj szkiełko pod mikroskopem; obszar z produktem o intensywnym niebieskim kolorze wskazuje na starzenie się neuronów w organoidzie.
Po kriosekcji organoidów należy usunąć nadmiar roztworu montażowego, przenosząc szkiełka do stojącego pojemnika ze szkiełkiem z pokrywką i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych