Barwienie immunohistochemiczne białka S-100 w biopsji odbytniczej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:02 min. • July 8th, 2025
Weź stałe biopsje ssania ludzkiego odbytnicy z odsłoniętymi antygenami białkowymi i inaktywowanymi endogennymi peroksydazami.
Dodaj roztwór blokujący, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Zastąp roztwór blokujący pierwszorzędowymi przeciwciałami, które wiążą się z docelowym białkiem komórek glejowych, S-100, markerem choroby Hirschsprunga.
Usuń niezwiązane przeciwciała i inkubuj z polimerami peroksydazy, aby wzmocnić sygnał.
Umyć, aby usunąć nadmiar polimeru. Dodaj przeciwciała drugorzędowe, które wiążą się z polimerami enzymatycznym i przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Usuń niezwiązane przeciwciała i dodaj substrat chromogenny.
Peroksydazy reagują z podłożem, tworząc kolorowy osad.
Spłucz, aby usunąć nadmiar osadu.
Dodaj barwnik, aby zabarwić jądra.
Umyć roztworem kwasu i etanolu, aby usunąć nadmiar barwnika.
Następnie odwodnić skrawki za pomocą rosnących stężeń etanolu, a następnie ksylenu.
Na koniec zamontuj i obserwuj pod mikroskopem, aby uwidocznić barwienie wskazujące na obecność docelowego białka.
Wyrzuć nadmiar albuminy surowicy bydlęcej i oznacz komórki 50 mikrolitrami podstawowego przeciwciała będącego przedmiotem zainteresowania w temperaturze 4 stopni Cels
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych