JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:14 min. • July 8th, 2025
Regiony miejsca sinawego, zlokalizowane obustronnie w pniu mózgu myszy, zawierają neurony wytwarzające noradrenalinę i regulują różne regiony w mózgu.
Aby wykryć te obszary miejsca sinawego, zacznij od szklanego szkiełka zawierającego nieruchome, kriokonserwowane sekcje pnia mózgu myszy.
Umyj szkiełko buforem w celu usunięcia śladów utrwalających.
Dodaj bufor zawierający detergent i inkubuj, aby przepuszczalność membran, a następnie umyć.
Wprowadź pierwotne przeciwciała specyficzne dla enzymu β-hydroksylazy dopaminy, który przekształca dopaminę w noradrenalinę, neuroprzekaźnik.
Inkubować, aby umożliwić przeciwciałom interakcję z dopaminą β-hydroksylazą.
Umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Następnie dodaj zielone przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem i inkubuj w ciemności.
Przeciwciała drugorzędowe wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, a następnie myją.
Dodaj pożywkę montażową do sekcji mózgu, a następnie przykryj i wysusz.
Obserwuj szkiełka pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Zielona fluorescencja reprezentująca znakowane neurony wytwarzające noradrenalinę w sekcjach mózgu wskazuje na obecność regionów miejsca sinawego.
Pierwszego dnia umyj plastry mó
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych