Znakowanie wirusowe i przeszczepianie komórek wyniosłości przyśrodkowej zwoju przyśrodkowego do badań in vivo

Pobranie tkanki wyniosłości przyśrodkowej zwoju, zawierającej progenitorów interneuronów korowych, z genetycznie zmodyfikowanych zarodków myszy.

Dodaj polimer kationowy i zdysocjuj tkankę do zawiesiny jednokomórkowej.

Dodać wektory lentiwirusowe niosące zależny od rekombinazy Cre reporter GFP otoczony miejscami lox. Inkubować.

Polimer neutralizuje ładunki błony komórkowej wirusa i gospodarza, umożliwiając fuzję wirusa i uwalnianie RNA.

RNA wirusa jest transkrybowane wstecznie i integrowane z genomem gospodarza.

Odwirować i wyrzucić supernatant. Wchłonąć nadmiar mediów.

Przenieś komórki na hydrofobową powierzchnię i załaduj je do urządzenia do wstrzykiwania.

Wstrzyknij komórki do znieczulonej kory szczeniaka myszy.

Pozwól szczeniakowi dojść do siebie i rosnąć.

Przeszczepione komórki progenitorowe różnicują się w dojrzałe interneurony w korze.

Podgrupa tych interneuronów ulega koekspresji rekombinazy Cre i RFP.

W tych interneuronach Cre wycina miejsca lox, odwracając gen GFP i umożliwiając jego ekspresję.

Wizualizacja współekspresji RFP i GFP w celu identyfikacji interneuronów wyrażających Cre.

Po przygotowaniu lentiwirusa i rozcięciu MGE zgodnie ze wskazówkami zawartymi w pisemnym p