JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:29 min. • July 8th, 2025
Weźmy znieczuloną mysz, której wszczepiono kaniulę prowadzącą do mózgu.
Atrapa sondy wewnątrz kaniuli zapobiega przedostawaniu się resztek tkanki.
Umieść obrożę na szyi myszy.
Zastąp atrapę sondy sondą mikrodializacyjną zawierającą specjalistyczną membranę półprzepuszczalną, która umożliwia przepływ cząsteczek o dużej masie cząsteczkowej.
Sonda jest podłączona do pomp przez otwory wlotowe i wylotowe w celu regulacji przepływu bufora fizjologicznego.
Przywiąż mysz do klatki za pomocą obroży, pozwól jej się zregenerować i zainicjuj przepływ.
Bufor dostaje się do tkanki mózgowej przez wlot i miesza się z płynem śródmiąższowym lub ISF w przestrzeni zewnątrzkomórkowej, która zawiera białka zaangażowane w komunikację komórkową.
Składniki dyfundują przez membranę i są zbierane przez wylot we frakcjach.
Pobrany ISF, zawierający białka zewnątrzkomórkowe, jest gotowy do analizy.
Umieść obrożę na szyi znieczulonego zwierzęcia z wszczepioną kaniulą prowadzącą, a następnie zdejmij nakrętkę kołpakową i atrapę sondy. Powoli włóż sondę do mikrodializy przez kaniulę prowadzącą i dokręć nakrętkę kołpakową.
Następnie umieść mysz w klatce połączonej z systemem swobodnego ruchu i przywiąż mysz do obroży. Po upływie co najmniej jednej godziny należy kolejno zatrzymać pompę rolkową i pompę strzykawkową, ponownie uruchamiając pompy z pompą strzykawkową ustawioną na 20% szybciej niż pompa rolkowa i umieścić wolny koniec rurki wylotowej na chłodzonym kolektorze frakcji, aby zebrać ISF mózgu. Po uzyskaniu odpowiedniej objętości eksperymentalnej wyjmij sondę i zajmij się odzyskiwaniem myszy, jak pokazano poniżej.