JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:23 min • July 8th, 2025
Zacznij od dodania zimnej zawiesiny glejaka i komórek mikrogleju, z których każda jest barwiona innym barwnikiem fluorescencyjnym, do zimnego roztworu matrycy polimerowej.
Zimny stan zapobiega przedwczesnej polimeryzacji matrycy.
Następnie przenieś mieszaninę do porowatej wkładki komory w płytce hodowlanej.
Inkubować, aby umożliwić polimeryzację matrycy, tworząc żel, który osadza komórki.
Dodaj pożywkę bez surowicy do wkładki i pożywkę wzrostową zawierającą surowicę do dołka poniżej, a następnie inkubuj.
Czynniki chemiczne zawarte w surowicy sprzyjają migracji komórek w kierunku pożywki bogatej w surowicę.
Dodatkowo mikroglej wydziela cząsteczki sygnałowe, które oddziałują z komórkami glejaka.
Zwiększa to migrację komórek glejaka do spodu porowatej wkładki, przypominając ich migrację z guza do otaczającej tkanki.
Usuń komórki z górnej części komory.
Teraz napraw pozostałe komórki utrwalaczem i umyj je buforem. Wyraźna fluorescencja komórek pomaga śledzić migrację komórek.
Rozmrozić matrycę w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez noc. Następnie przygotować matrycę o stężeniu 10 mg/ml w odpowiednich podłożach na lodzie. Następnie zbierz oznakowane komórki do zawiesiny w matrycy, jak pokazano wcześniej. Następnie pipetuj 1,5 razy 10 do piątej komórki GL261 w objętości 150 mikrolitrów, plus pięć razy 10 do czwartej komórki mikrogleju w 50 mikrolitrach do 1,5-mililitrowej probówki do mikrofugi.
Dodaj 2 razy 10 do piątych komórek GL261 w objętości 200 mikrolitrów do oddzielnej 1,5-mililitrowej probówki do mikrofuge. Wiruj komórki w mikrofugach przez pięć minut w temperaturze 120 razy g. Następnie ponownie zawieś komórki w 200 mikrolitrach zimnej matrycy na lodzie.
Na tym etapie ważne jest, aby mieć gotową tackę na lód w okapie. Rurki na końcówkach lodu przechowuj w lodówce. Upewnij się, że wszystko jest schłodzone, aby zapobiec przedwczesnej polimeryzacji dojrzałego żelu.
Po ponownym zawieszeniu umieść 50 000 komórek w objętości 50 mikrolitrów na środku górnej komory wkładu komory o wielkości porów 8 mikronów. Następnie inkubuj go w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 30 minut, aby umożliwić polimeryzację. Po 30 minutach dodaj 200 mikrolitrów pożywki bez surowicy do górnej komory i 700 mikrolitrów surowicy zawierającej pożywkę do wzrostu komórek do dolnej studzienki.
Po inkubacji przez 48 godzin usunąć komórki z górnej części komory poprzez delikatne aspiracja. Zamocuj komory jak poprzednio i zastąp utrwalacz 500 mikrolitrami 1X PBS przed obrazowaniem komórek.
Niniejszy artykuł opisuje metodę badania migracji komórek glejaka w kontrolowanym środowisku z wykorzystaniem macierzy polimerowej. Podejście to polega na kokulturywacji komórek glejaka oraz mikrogleju w celu obserwacji ich interakcji i wzorców migracji.
Modelowanie inwazji glejaka wielopostaciowego z wykorzystaniem macierzowego systemu kokultury z mikroglejem umożliwia mechanistyczną ocenę ryzyka w zakresie interakcji między guzem a mikrośrodowiskiem na etapie odkrywczym. Podejście to zapewnia wiarygodność prognostyczną w walidacji celów terapeutycznych i wspiera ciągłość translacyjną poprzez odzwierciedlenie istotnej dla przebiegu choroby migracji komórek. System ten służy do podejmowania wczesnych decyzji portfelowych poprzez wyjaśnianie czynników mikrośrodowiskowych napędzających progresję guza.
Ten model kokultury oparty na macierzy integruje się z kontinuum od odkrycia do badań przedklinicznych, umożliwiając weryfikację hipotez dotyczących wpływu mikrośrodowiska na inwazję nowotworową.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 29 sierpnia 2026