JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:39 min. • July 8th, 2025
Weź mikropłytkę z wkładkami transwell pokrytymi białkami ECM, aby promować adhezję komórek.
Dodaj komórki śródbłonka mikronaczyniowego ludzkiego mózgu lub HBMEC do wkładek i pożywki wzrostowej do dolnych przedziałów.
Inkubuj, pozwalając komórkom przylegać i rosnąć w monowarstwę. Komórki te wyrażają ścisłe połączenia, naśladując śródbłonek bariery krew-mózg, który ogranicza przechodzenie komórek i cząsteczek.
Usuń nośnik. Dodać komórki jednojądrzaste krwi obwodowej lub PBMC do insertów i pożywkę hodowlaną do dolnych przedziałów.
Inkubuj, umożliwiając limfocytom PBMC interakcję z komórkami śródbłonka, a następnie przejście między nimi, proces zwany transmigracją.
Opłucz dno wkładki, zbierając przylegające transmigrujące komórki do dolnych komór.
Wprowadź mikrogranulki fluorescencyjne jako odniesienie do oznaczania ilościowego komórek.
Przenieść zawiesinę do probówki, odwirować, wyrzucić supernatant i ponownie zawiesić w koktajlu przeciwciał sprzężonych z fluoroforem w celu znakowania limfocytów.
Transmigrowane limfocyty są gotowe do oznaczania ilościowego za pomocą cytometrii przepływowej.
Aby przygotować wkładki do hodowli komórkowych do testu transmigracji, najpierw dodaj 100 mikro
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych