JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:58 min. • July 8th, 2025
Weźmy nieruchomy fragment mózgu myszy zawierający jądro podstawne Meynerta, bogate we włókna nerwowe wyrażające enzym acetylotransferazę choliny.
Sekcja jest poddawana wstępnej obróbce w celu dezaktywacji endogennej peroksydazy.
Dodaj detergent, aby przepuszczalnie błony komórkowe, a następnie roztwór blokujący, aby zapobiec wiązaniu się nieswoistych przeciwciał.
Zastąp roztwór pierwszorzędowymi przeciwciałami, które wiążą się z acetylotransferazą choliny.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał. Inkubować z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi biotyną, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Usuń niezwiązane przeciwciała i dodaj kompleksy awidyna-biotyna-peroksydaza, które wiążą się z przeciwciałami drugorzędowymi.
Umyć, aby usunąć nadmiar kompleksów.
Dodaj chromogenny substrat, który reaguje z peroksydazą, tworząc kolorowy osad.
Spłucz wodą destylowaną, aby usunąć nadmiar osadu.
Przenieść przekrój na zżelowane szkiełko.
Następnie odwodnić sekcję za pomocą rosnących stężeń etanolu, a następnie ksylenu.
Zamontuj przekrój i obserwuj pod mikroskopem, aby uwidocznić poplamione włókna nerwowe.
W celu znakowania immunohistochemicznego skrawków tkanki,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych