Pomiar wychwytu dopaminy w synaptosomach mózgu myszy za pomocą dopaminy znakowanej radioaktywnie

Zbierz synaptosomy, struktury związane z błoną pochodzącą z nienaruszonych presynaptycznych zakończeń synaps neuronalnych, które zawierają transportery dopaminy (DAT), z mózgu myszy.

Napełnić probówki buforem zawierającym ligandy, a probówki referencyjne buforem zawierającym ligandy i inhibitor DAT.

Dodaj synaptosomy.

Ligandy hamują enzymy rozkładające dopaminę i inne transportery, zapobiegając degradacji dopaminy i niespecyficznemu wychwytowi.

Wprowadź nieznakowaną i znakowaną radioaktywnie dopaminę.

W warunkach testowych synaptosomalny DAT wychwytuje dopaminę.

W warunkach referencyjnych inhibitor zapobiega wychwytowi dopaminy za pośrednictwem DAT, umożliwiając jedynie wychwyt w tle.

Dodaj próbki do filtrów z mikrofibry, które zatrzymują synaptosomy.

Umyj, aby usunąć niezwiązaną dopaminę.

Przenieś filtry do probówek scyntylacyjnych.

Dodać płyn scyntylacyjny zawierający związek wrażliwy na promieniowanie .

Umieść probówki w liczniku scyntylacyjnym.

Emisje radioaktywne z dopaminy pobudzają związek do emitowania światła, które jest mierzone przez licznik.

Odejmij odniesienie od danych testowych, aby zmierzyć wychwyt synaptosomalnej dopaminy.

Na tym etapie dodaj 440 mikrolitrów buforu