Znakowanie interneuronów wypełnionych biocytyną w wycinkach hipokampa szczurów w celu wizualizacji
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:06 min. • July 8th, 2025
Weź utrwalone i przepuszczalne plastry hipokampa szczura zawierające interneurony wypełnione biocytyną z inaktywowanymi endogennymi peroksydazami.
Dodać kompleksy awidyna-biotyna (ABC) zawierające peroksydazę chrzanową (HRP) i inkubować, umożliwiając awidynie związanie się z biocytyną.
Zmyć niezwiązane ABC.
Dodaj mieszaninę substratu chromogenicznego i wzmacniacza metalu, a następnie inkubuj.
Wprowadź nadtlenek wodoru, aby aktywować HRP, który utlenia podłoże, tworząc ciemny osad, podczas gdy wzmacniacz poprawia kontrast.
Przenieś plastry na bibułę filtracyjną i usuń nadmiar buforu. Potraktuj tetratlenkiem osmu, aby zwiększyć kontrast.
Umieść plastry na szkiełku i zamontuj. Odwodnić je, zwiększając stężenie etanolu.
Umyj plastry w absolutnym etanolu i tlenku propylenu.
Dodaj żywicę, aby nacieknąć tkanki.
Umieść plastry w planszecie i podgrzej, aby spolimeryzować żywicę. Przenieś plastry na szkiełko, umieść szkiełko nakrywkowe i zestal żywicę.
Za pomocą mikroskopii świetlnej wizualizuj ciemno zabarwione interneurony wypełnione biocytyną.
Umieścić skrawki w czystej szklanej fiolce zawierającej PBS. Przeprowadź reakcję HRP awidyny, najpierw inkubując skrawki w kompleksie biotyny awidy
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych