JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:24 min. • July 8th, 2025
Zacznij od wycinka mózgu móżdżku myszy zawierającego włókna równoległe, włókna pnące i komórki Purkinjego, niezbędne do kontroli motorycznej.
Wycinek jest zanurzony w sztucznym płynie mózgowo-rdzeniowym, z elektrodą rejestrującą przymocowaną do komórki Purkinjego i elektrodami stymulującymi w pobliżu włókien równoległych i pnących.
Zastosuj bodźce elektryczne do równoległych włókien, powodując uwolnienie glutaminianu, pobudzającego neuroprzekaźnika w pobliżu komórki Purkinjego.
Neuroprzekaźniki wiążą się z receptorami glutaminianu, co prowadzi do napływu jonów, które aktywują komórki Purkinjego i generują sygnał elektryczny.
Dostosuj intensywność bodźca, aby uzyskać optymalną odpowiedź komórek Purkinjego.
Następnie dostarczaj powtarzające się stymulacje do włókien pnących i równoległych.
Bodźce z włókien pnących aktywują bramkowane napięciem kanały wapniowe na komórce Purkinjego, powodując znaczny napływ wapnia.
Powoduje to internalizację receptorów glutaminianu, zmniejszając wrażliwość komórki na glutaminian.
Wywołuje to długotrwałą depresję, charakteryzującą się zmniejszoną reakcją na równoległą stymulację włókien.
W celu długotrwałej indukcji depresji stymuluj warstwę molekularną impulsem o długości 0,1 milisekundy i zastosuj bodziec dwuimpulsowy, aby zidentyfikować równoległe pobudzające włókna prądy postsynaptyczne. Należy zaobserwować sparowane ułatwienie impulsów i stopniowy wzrost amplitudy w stosunku do wzrostu intensywności stymulacji. Aby zarejestrować odpowiedź testową, zastosuj pojedynczy impuls 0,1 Hz i dostosuj intensywność bodźca tak, aby wywołana amplituda wynosiła około 200 pikoamperów.
Stymuluj włókna pnące na dole warstwy komórek Purkinjego i aby zidentyfikować równoległe pobudzające prądy postsynaptyczne wywołane aktywacją włókien pnących, zastosuj bodziec o podwójnym impulsie. Sparowane obniżenie pulsu powinno być obserwowane w sposób całkowity lub żaden, w korelacji ze wzrostem intensywności stymulacji.