JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:41 min. • July 8th, 2025
Weźmy model bariery krew-mózg (BBB) in vitro składający się z dwóch przedziałów oddzielonych porowatą błoną.
Górny lub jasny przedział zawiera komórki śródbłonka mikronaczyniowego. Komórki te wyrażają ścisłe połączenia, naśladując śródbłonek bariery krew-mózg, który ogranicza przechodzenie komórek i cząsteczek.
Dolny lub abluminalny przedział zawiera neurony, astrocyty i mikroglej, reprezentujące miąższ mózgu.
Wprowadź wirusa neurotropowego do przedziału luminalnego, aby zasymulować infekcję przenoszoną przez krew i inkubować.
Wirus jest endocytozowany przez komórki śródbłonka, ulega transportowi wewnątrzkomórkowemu w pęcherzykach i jest uwalniany po stronie brzusznej.
Po inkubacji usunąć górną komorę. Pobrać próbkę pożywki od strony abluminalnej, aby ocenić ilość wirusa, potwierdzając pomyślne przejście warstwy śródbłonka.
Dodaj świeże podłoże i ponownie inkubuj.
Wirus dostaje się do komórek nerwowych poprzez endocytozę, replikuje się i uwalnia potomstwo wirusa.
Określ ilościowo zwiększoną zewnątrzkomórkową wiremię, aby potwierdzić neuroinwazję i replikację wirusa.
Po ustawieniu mini urządzenia BBB mózgu, jak pokazano, dodaj 3500 jednostek tworzących płytki nazębne francuskiego szczepu wirusa neurotropowego wirusa żółtej gorączki, rozcieńczonych w 50 mikrolitrach 2% pożywki z komórkami śródbłonka FBS bardzo ostrożnie na wierzchu przedziału światła. Zaszczep kontrolny mózg BBB mini 50 mikrolitrami 2% pożywki z komórek śródbłonka FBS bez wirusa. Następnie umieść mini urządzenie do mózgu BBB narażone na działanie wirusa w inkubatorze na 24 godziny.
Następnego dnia usuń wkładki, aby określić przepuszczalność komórek śródbłonka w studzience towarzyszącej, jak właśnie pokazano, i zachowaj 1 mililitr próbki z każdej studzienki, aby określić miano wirusa w komorze brzusznej.
Delikatnie pod wkładką, aby uniknąć wycieku komory oświetleniowej do komory abluminalnej.