JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:38 min. • July 8th, 2025
Weźmy przylegające hodowle komórek grzebienia nerwowego wyhodowane na szkiełkach nakrywkowych pokrytych hydrożelami o różnej sztywności. Umyj komórki buforem.
Dodaj paraformaldehyd, aby utrwalić komórki i zachować morfologię komórkową.
Umyj komórki buforem, aby usunąć nadmiar paraformaldehydu.
Następnie dodaj niejonowy detergent, aby przepuszczalność błon komórkowych.
Umyj komórki buforem, aby usunąć nadmiar detergentu.
Następnie wprowadź rozwiązanie blokujące, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu.
Inkubuj komórki za pomocą nitkowatej sondy aktynowej o wysokim powinowactwie, która wiąże się z filamentami aktyny.
Umyj ogniwa buforem, aby usunąć wszelkie niezwiązane sondy.
Dodaj fluorescencyjny barwnik jądrowy, aby zabarwić jądra, a następnie przemyj buforem, aby usunąć nadmiar barwnika.
Nałóż podłoże montażowe na szkiełka nakrywkowe i zbadaj wybarwione komórki pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Komórki wyhodowane na sztywniejszych hydrożelach wykazują zwiększone tworzenie włókien aktynowych i bardziej rozproszoną morfologię niż te wyhodowane na bardziej miękkich hydrożelach.
Użyj pęsety, aby przetransportować szkiełka nakrywkowe na nową płytkę, aby zminimalizować fałszywe sygnały z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych