Sieciowanie neuronalnych białek powierzchniowych w mózgu myszy za pomocą chemicznego testu sieciowania

Zacznij od odizolowanego mózgu myszy w lodowatym buforze.

Przenieś mózg do macierzy mózgowej, stroną brzuszną skierowaną do góry.

Włóż żyletki, aby seryjnie przeciąć przednią część mózgu.

Podnieś plastry, trzymając ostrza razem, pozostawiając tylną część z tyłu. Oddziel żyletki i umieść je na chłodnej powierzchni plasterkami mózgu skierowanymi do góry.

Wybierz żądany plasterek i wyodrębnij interesujący go obszar.

Podziel i zmiel tkankę.

Przenieś zmieloną tkankę do probówki zawierającej płyn mózgowo-rdzeniowy uzupełniony substancją chemiczną BS3.

Odwróć i wymieszaj probówkę, aby rozbić tkankę na mniejsze kawałki, a następnie inkubuj z rotacją.

BS3, substancja chemiczna nieprzepuszczalna dla błony komórkowej, sieciuje białka powierzchniowe neuronów, takie jak receptory GABA, podczas gdy wewnętrzne receptory GABA pozostają niezmienione.

Dodaj glicynę, aby wygasić reakcję sieciowania.

Próbka jest gotowa do oceny poziomów powierzchniowych receptorów GABA.

Na początek szybko usuń mózg z czaszki uśpionej myszy C57 black 6J. Zanurz go na szalce Petriego zawierającej lodowaty PBS na 10 do 15 sekund. Umieść schłodzony mózg w macierzy mózgowej na lodzie skierowanym brzuszną stroną do góry. Ab