Przetwarzanie mózgu myszy do dalszej analizy

Weź świeżo zebrany mózg myszy i zamroź go błyskawicznie we wstępnie schłodzonym izopentanie, aby szybko zachować tkanki.

Następnie przenieś mózg, korą mózgową do góry, do zamrożonej macierzy mózgowej, aby utrzymać zimne środowisko podczas krojenia.

Pozwól mózgowi zrównoważyć się z temperaturą matrycy. Wyrównaj go w matrycy wzdłuż zatok strzałkowych i poprzecznych, aby zapewnić symetryczne przekroje.

Włóż schłodzone ostrza do mózgu, zapewniając prawidłowe ustawienie.

Następnie dociśnij je równomiernie, aby uzyskać jednolite sekcje mózgu.

Wyjmij ostrza z sekcjami i umieść je rostralną stroną do góry na zamarzniętej szklanej płycie.

Uporządkuj sekcje od orientacji rostralnej do ogonowej we właściwej kolejności anatomicznej. Teraz je rozdziel.

Korzystając z odpowiedniego odniesienia do mózgu, zlokalizuj i wytnij obszar zainteresowania z sekcji.

Przenieść wyciętą tkankę do wstępnie schłodzonej fiolki w celu dalszej analizy.

Po usunięciu mózgów z uśpionych dorosłych myszy dzikiego typu CD-1, błyskawicznie zamroź tkankę na 60 sekund w ciekłym azocie lub izopentanie, wstępnie schłodzonym suchym lodem i przechowuj ją w temperaturze -80 stopni Celsjusza.

Na 24 godziny przed wypreparowaniem t