JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:42 min. • April 29th, 2025
Weź szkiełko pokryte polimerem z sekcjami tkanki mózgowej myszy zawierającymi neurony dopaminowe wyrażające hydroksylazę tyrozyny, kluczowy enzym do syntezy dopaminy.
Zaznacz sekcje hydrofobowym pisakiem, aby zapewnić jednolite barwienie.
Utrwal tkankę w roztworze acetonu i metanolu, aby zachować morfologię tkanki.
Spłucz buforem zawierającym detergent, aby przeniknąć błony komórkowe.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi na hydroksylazę tyrozyny w neuronach dopaminowych, a następnie umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe znakowane barwnikiem fluorescencyjnym, barwnik jądrowy i inhibitory RNazy.
Podczas inkubacji przeciwciała drugorzędowe wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, barwniki jądrowe znakują jądro, a inhibitory RNaz dezaktywują RNazy.
Spłukać buforem. Następnie odwodnić skrawki tkanki w rosnących stężeniach etanolu.
Inkubuj w ksylenie, aby oczyścić tkankę.
Przetworzone skrawki tkanek są teraz gotowe do mikrodysekcji wychwytywania laserowego, co umożliwia precyzyjną wizualizację i preparację docelowych neuronów dopaminowych.
Aby przeprowadzić immunohistochemię, użyj hydrofobowego pisaka, aby obrysować tkankę i p
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych