Immunohistochemia wycinków tkanki mózgowej myszy do celowania w neurony dopaminowe

0 wyświetleń2:42 min • April 29th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Weź szkiełko pokryte polimerem z sekcjami tkanki mózgowej myszy zawierającymi neurony dopaminowe wyrażające hydroksylazę tyrozyny, kluczowy enzym do syntezy dopaminy.
Zaznacz sekcje hydrofobowym pisakiem, aby zapewnić jednolite barwienie.
Utrwal tkankę w roztworze acetonu i metanolu, aby zachować morfologię tkanki.
Spłucz buforem zawierającym detergent, aby przeniknąć błony komórkowe.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami skierowanymi na hydroksylazę tyrozyny w neuronach dopaminowych, a następnie umyć w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe znakowane barwnikiem fluorescencyjnym, barwnik jądrowy i inhibitory RNazy.
Podczas inkubacji przeciwciała drugorzędowe wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi, barwniki jądrowe znakują jądro, a inhibitory RNaz dezaktywują RNazy.
Spłukać buforem. Następnie odwodnić skrawki tkanki w rosnących stężeniach etanolu.
Inkubuj w ksylenie, aby oczyścić tkankę.
Przetworzone skrawki tkanek są teraz gotowe do mikrodysekcji wychwytywania laserowego, co umożliwia precyzyjną wizualizację i preparację docelowych neuronów dopaminowych.

Aby przeprowadzić immunohistochemię, użyj hydrofobowego pisaka, aby obrysować tkankę i pozwól jej wyschnąć. Następnie w roztworze metanolu acetonowego 1 do 1 utrwal tkankę w temperaturze minus 20 stopni Celsjusza przez 10 minut. Po wyjęciu tkanki z zamrażarki przykryj skrawki 100 do 200 mikrolitrami przeciwciała przeciwko hydroksylazie tyrozyny w PBS i 1% trytonie przez 10 minut.

Następnie użyj PBS z 1% trytonem do przepłukania szkiełek przed pokryciem sekcji 100 do 200 mikrolitrami koziego antykrólika IgG, oznaczonego Alexa Fluor 488. Inkubować przez pięć minut, a następnie użyć PBS do dwukrotnego przepłukania szkiełek. Następnie odwadniaj próbki w stopniowanej serii etanolu wolnego od RNaz przez 30 sekund każda, jak pokazano wcześniej w tym filmie. Inkubować w ksylenie przez jedną minutę i drugie płukanie przez pięć minut. Wyjmij szkiełka bezpośrednio przed użyciem LCM i pozostaw je do wyschnięcia na powietrzu.

07:01

Izolacja RNA z subpopulacji specyficznych dla komórek za pomocą mikrodysekcji laserowej w połączeniu z szybkim znakowaniem immunologicznym

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:42

Laserowa mikrodysekcja ludzkiego nabłonka gruczołu krokowego do analizy RNA

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:31

Mikrodysekcja wspomagana laserowo (LAM) jako narzędzie do profilowania transkrypcji poszczególnych typów komórek

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:14

Immunohistochemia do identyfikacji regionu miejsca sinawyego w wycinkach mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

02:58

Immunohistochemiczne barwienie włókien nerwowych w jądrze podstawnym Meynera mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

03:04

Barwienie immunologiczne neuronów w wycinkach mózgu myszy po fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:30

Podstawa immunohistochemii na kriowyciętej tkance mózgowej szczura: przykładowe barwienie mikrogleju i neuronów

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

09:35

Środowiskowe modulacje liczby neuronów dopaminowych śródmózgowia u dorosłych myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

08:19

Stereologiczne oszacowanie liczby neuronów dopaminergicznych w istocie czarnej myszy przy użyciu frakcjonatora optycznego i standardowego sprzętu mikroskopowego

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

07:44

Lokalizacja miejsca sinawyego w mózgu myszy

Powiązane filmy

0 Wyświetlenia

Ostatnia aktualizacja: 1 sierpnia 2026